[发明专利]建立时间分辨荧光免疫层析法检测MxA试剂盒在审
| 申请号： | 201811048834.4 | 申请日： | 2018-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN109239334A | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 刘斌;李宝民;关恒;张蕾;刘戈;赵青;史永丰;刘宁;李添伟;隋宝珍;张金玲;仇淑园;孙净;黄景林;高敏;孙晓婷;林林;朱道林;孙玉峰;王贺 | 申请（专利权）人： | 吉林大学;长春恒晓生物科技有限责任公司 |
| 主分类号： | G01N33/558 | 分类号： | G01N33/558;G01N33/533 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 白冬冬 |
| 地址： | 130012 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 时间分辨荧光免疫 层析法 试纸卡 试剂盒 检测 试纸条 时间分辨荧光免疫法 底板 昆虫细胞系统 硝酸纤维素膜 分析仪测定 蛋白制备 低渗溶液 基因重组 昆虫细胞 人体细胞 塑料外壳 荧光微球 检测线 结合垫 吸水垫 校准品 样品垫 质控线 纸板 荧光 包被 搭接 抗体 吸附 制备 装入 近似 切割 组装 | ||
1.一种建立时间分辨荧光免疫层析法检测MxA试剂盒，其特征在于：包括试纸卡和低渗溶液；在底板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有MxA抗体-荧光微球的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成试纸板，然后切割成3-5mm宽的试纸条，将试纸条装入塑料外壳形成试纸卡。
2.根据权利要求1所述的建立时间分辨荧光免疫层析法检测MxA试剂盒，其特征在于：硝酸纤维素膜上包被有MxA抗体形成检测线和抗IgG抗体形成质控线。
3.根据权利要求1所述的建立时间分辨荧光免疫层析法检测MxA试剂盒，其特征在于：荧光微球表面修饰官能团为羧基、羟基或环氧基的一种，直径为100-500nm；根据权利要求1所述的荧光微球标记镧系元素螯合物，包括铕(Eu)、钐(Sm)、铒(Er)、钕(Nd)螯合物中一种；进一步优选为铕螯合物(Europium Chelate)，激发波长是420nm，发射波长是615nm。
4.根据权利要求1所述的建立时间分辨荧光免疫层析法检测MxA试剂盒，其特征在于：低渗溶液是Tris,磷酸盐，碳酸盐缓冲液，盐浓度低于10mm,含0.1-0.5%NP-40, 用于裂解细胞，释放出细胞内的蛋白。
5.根据权利要求1所述的建立时间分辨荧光免疫层析法检测MxA试剂盒，其特征在于：所用时间分辨荧光免疫层析（TRFIA）分析仪，波长350-430nm激发光作用后，延时100-400uS，再测定波长600-650nm荧光强度。
6.根据权利要求1所述的建立时间分辨荧光免疫层析法检测MxA试剂盒，其特征在于：MxA抗体-荧光微球，选用镧系元素螯合物荧光标记羧基修饰微球，用碳二亚胺(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(sulfo-NHS)处理羧基修饰荧光微球后，MxA抗体偶联到上述荧光微球上，MxA抗体与荧光微球重量比为1：50-1：5，用喷膜仪将MxA抗体-荧光微球喷涂于结合垫上，干燥后，封存备用。
7.根据权利要求1所述的建立时间分辨荧光免疫层析法检测MxA试剂盒，其特征在于：制备MxA校准品：用PCR从pCS6-MX1扩增出MxA DNA（核酸序列1-1989），构建pFastBac-Flag-MxA载体，转导到HD10Bac 细菌中，产生重组Flag-MxA AcNPV（昆虫病毒）质粒；再转导此质粒进到昆虫细胞（SF9细胞），产生重组Flag-MxA AcNPV；此病毒感染SF9细胞后，表达出Flag-MxA蛋白；用Anti-Flag 抗体亲和层析法纯化出Flag-MxA蛋白，此纯化Flag-MxA蛋白作为校准品。
8.根据权利要求1所述的建立时间分辨荧光免疫层析法检测MxA试剂盒，其特征在于：Flag-MxA为校准品，用TRFIA分析仪测定不同浓度MxA校准品试纸卡检测线上呈现荧光强度，制备MxA浓度标准曲线，建立MxA浓度标准卡，输入到TRFIA分析仪，建立TRFIA分析仪自动显示样品中MxA浓度检测系统。
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