[发明专利]从体外培养的细胞中分离Pig-a基因突变细胞的方法在审
| 申请号： | 201811044150.7 | 申请日： | 2018-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN110885778A | 公开（公告）日： | 2020-03-17 |
| 发明（设计）人： | 李若婉;黄鹏程;周长慧;常艳 | 申请（专利权）人： | 上海益诺思生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/00 | 分类号： | C12N5/00 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 薛琦;吕学辰 |
| 地址： | 201203 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 体外 培养 细胞 分离 pig 基因突变 方法 | ||
1.从体外培养的细胞中分离Pig-a基因突变细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将免疫荧光染料标记的抗GPI锚连蛋白抗体、抗所述免疫荧光染料的磁珠与所述的细胞混合；
(2)分离磁珠标记的细胞与磁珠未标记的细胞，所述磁珠标记的细胞为Pig-a基因突变阴性细胞，磁珠未标记的细胞为Pig-a基因突变阳性细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，将所述的细胞与所述免疫荧光染料标记的抗GPI锚连蛋白抗体混合后，再加入抗所述免疫荧光染料的磁珠；
和/或，步骤(2)中所述的分离的次数为1次以上。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述的细胞与所述的免疫荧光染料标记的抗GPI锚连蛋白抗体混合后，还进行冰上孵育；所述的混合较佳地为将所述的细胞加入到所述的抗GPI锚连蛋白抗体中；
和/或，在抗所述免疫荧光染料的磁珠加入后，进行冰上避光孵育。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的冰上孵育或者所述的冰上避光孵育的时间优选20～40min，更优选25～35min，最优选30min；和/或，在所述的冰上孵育或者所述的冰上避光孵育后使用PBS洗涤细胞，所述的PBS优选含有2％的牛血清蛋白。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗涤的方法为离心，所述离心的速度优选800～1500rpm，更优选1000rpm，所述离心的时间优选3～8min，更优选5min。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的细胞与所述的免疫荧光染料标记的抗GPI锚连蛋白抗体的相对量为24～40μL/2×106个细胞。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的GPI锚连蛋白为CD55和/或CD59。
8.如权利要求1～7任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞为人淋巴细胞例如人成淋巴TK6细胞。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的分离为采用磁珠分选技术。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，使用磁柱和磁铁架进行所述分离。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海益诺思生物技术股份有限公司，未经上海益诺思生物技术股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811044150.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：垃圾拦截篮
- 下一篇：素材选择方法、装置及存储介质
