[发明专利]一种三阴乳腺癌预后预测标志物及其检测方法

说明书

本发明涉及一种三阴乳腺癌预后预测标志物，其为EVI‑1蛋白或CRT蛋白。进而提出一种上述的三阴乳腺癌预后预测标志物的检测方法，该检测方法包括以下步骤：1)制作乳腺癌组织石蜡切片；2)脱蜡和水化；3)高压加热枸橼酸钠缓冲液组织抗原修复液；4)阻断内源性过氧化物酶；5)加EVI‑1蛋白一抗，CRT蛋白一抗或空白对照试剂；6)加酶标聚合物；7)显色；8)复染；9)脱水、透明、封片；10)评价。本发明的三阴乳腺癌预后预测标志物及其检测方法，通过脱蜡和水化、高压加热、阻断内源性过氧化物酶等步骤，对标志物进行了检测，根据EVI‑1蛋白，CRT蛋白表达的不同，得到了不同程度的多个表达组。

技术领域

本发明涉及预后预测标志物技术领域，特别涉及一种三阴乳腺癌预后预测标志物及其检测方法。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，在常见恶性肿瘤的发病率中高居世界第二位，且近年来发病率呈逐年升高趋势，给社会和家庭造成了严重的经济和心理负担。三阴乳腺癌(Triple-negative breast cancer，TNBC)是乳腺癌中侵袭性最强的一种亚型，约占全部乳腺癌的20％。TNBC即雌激素受体(Estrogen receptor，ER)、孕激素受体(Progesteronereceptor，PR)和人表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor2，Her-2)皆表达缺失的乳腺癌，因其特殊的致病机理，因其缺乏靶点，目前尚无有效的内分泌、靶向治疗。目前无论是病因的基础研究或者是临床诊断和治疗研究，都是为了延长患者的生存时间和提高生存质量，使患者有一个好的预后。因此，加强对三阴乳腺癌预后规律的探索是非常必要的。

EVI-1蛋白，又称MDS1和EVI-1蛋白复合体基因座(MDS1and EVI1 complex，MECOM)蛋白，属于锌指转录因子，在多种恶性肿瘤中表达上调，且与肿瘤的不良预后有关。在乳腺癌中，EVI-1蛋白可能通过促进乳腺癌细胞生长、侵袭等相关基因的表达，发挥致癌作用。CRT蛋白(calreticμLin)是骨骼肌肌质网膜上的钙结合蛋白，是一种多功能钙结合分子伴侣，文献报道其在促进肿瘤细胞增殖、迁移、黏附和诱导凋亡抵抗方面有重要作用。我们前期研究发现下调MDA-MB-231乳腺癌干细胞中CRT蛋白的表达能显著抑制乳腺癌干细胞的增殖、迁移；

现有技术中的三阴乳腺癌预后预测标志物包括：蛋白、信使RNA、DNA、microRNA、代谢产物，或这类生物分子的整合。迄今为止研究最多的还是蛋白，因为蛋白一般可以通过免疫组化评估。现有证据表明相关标志性蛋白的异常调节参与三阴乳腺癌的发生发展。但是，目前尚没有利用这些标识性蛋白准确预测TNBC预后的报道。

发明内容

本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种三阴乳腺癌预后预测标志物及其检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：

一种三阴乳腺癌预后预测标志物，所述三阴乳腺癌预后预测标志物为EVI-1蛋白或CRT蛋白。

上述的三阴乳腺癌预后预测标志物的检测方法，包括以下步骤：

1)制作乳腺癌组织石蜡切片；

2)脱蜡和水化

石蜡切片先后置于二甲苯中浸泡2次、15分钟/次，无水乙醇中浸泡2次、3分钟/次；分别在95％乙醇、85％乙醇中浸泡3分钟，用自来水冲淋1分钟；

3)高压加热枸橼酸钠缓冲液组织抗原修复液

加热枸橼酸钠缓冲液组织抗原修复液至沸腾；将脱蜡和水化后的切片放入置于耐高温染色架上的压力锅中，加热至喷汽，2分钟后，压力锅离开热源，自然冷却5分钟；用自来水冲洗使其冷却，待冷却至室温后取出切片；用蒸馏水冲洗2次、3分钟/次；再用PBS溶液冲洗3次、3分钟/次；

4)阻断内源性过氧化物酶