[发明专利]一种提高单核细胞向多潜能细胞转化的培养方法

权利要求书

1.一种提高单核细胞向多潜能细胞转化的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将单核细胞培养在培养液中，放入培养箱中，待细胞达80％-90％融合后，洗弃未贴壁的细胞；加入质量浓度0.25％胰蛋白酶进行消化处理直到细胞收缩呈圆形，加入培养液终止消化反应，采用离心分离3-5分钟，然后沉淀弃去上清液，沉淀物再加入培养液，吸管轻轻吹打细胞制成悬液；按1∶4比例传代培养到培养板上，置于培养箱中培养，每2-4天更换一次培养液；

(2)待步骤(1)中的培养板上的细胞长满后置于第一诱导培养液中进行诱导培养，两天将第一诱导培养液更换成第二诱导培养液，在诱导培养两天，然后将第二诱导培养液更换成培养液，诱导好的细胞在培养中继续培养，每2-4天更换一次培养液。

2.根据权利要求1所述的一种提高单核细胞向多潜能细胞转化的培养方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(2)中所述的培养液为KSFM培养液，并且加入体积百分比为10％的胎牛血清。

3.根据权利要求1所述的一种提高单核细胞向多潜能细胞转化的培养方法，其特征在于：步骤(1)中所述的培养箱的条件均为37℃、体积分数5％CO₂。

4.根据权利要求1所述的一种提高单核细胞向多潜能细胞转化的培养方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的第一诱导培养液，以含有体积百分比为10％胎牛血清的KSFM培养液为基础培养液，还包括有0.2-0.5mmol/L异丁基甲基黄嘌呤、3-5mmol/L地塞米松、120-350nmol/L胰岛素、0.5-1.2nmol/L三碘甲状腺原氨酸、0.1-0.25mmol/L吲哚美辛，1-2μmol/L罗格列酮。

5.根据权利要求4所述的一种提高单核细胞向多潜能细胞转化的培养方法，其特征在于：所述的第一诱导培养液，还含有50-100U/ml青霉素和50-100μg/ml链霉素。

6.根据权利要求1所述的一种提高单核细胞向多潜能细胞转化的培养方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的第二诱导培养液，以含有体积百分比为5％胎牛血清的KSFM培养液为基础培养液，还包括6-10μg/ml胰岛素，1-2nmol/L三碘甲状腺氨酸，1-2μmol/L罗格列酮。

7.根据权利要求1到7任一项所述的一种提高单核细胞向多潜能细胞转化的培养方法，其特征在于：步骤(2)所述的诱导好的细胞在培养中继续培养，具体过程为，将诱导好的细胞接种转移至含有培养液的6孔板中培养，初次传代时间为6-8天，细胞生长至90％融合，按照1∶4的比例转移转移至9cm平皿中进行传代培养，3-4天传代一次，连续传代5-7代后，获得状态良好的细胞，即为多潜能干细胞。