[发明专利]一种DNA的提取方法及试剂盒在审
| 申请号: | 201811009967.0 | 申请日: | 2018-08-31 |
| 公开(公告)号: | CN108866048A | 公开(公告)日: | 2018-11-23 |
| 发明(设计)人: | 罗云波;许文涛;黄昆仑;王沛;杜再慧;贺晓云 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
| 主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
| 代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
| 地址: | 100083 北京市海淀*** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 试剂盒 分子生物学研究 离心机 技术途径 技术要求 滤纸吸附 有机试剂 专业培训 提取DNA 可操作 离心柱 乙醇 苯酚 硅基 氯仿 破壁 微生物 样本 节约 环保 保证 | ||
1.一种DNA提取的方法,其特征在于,所示方法包括使用滤纸吸附DNA。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述滤纸包括纤维素滤纸。
3.根据权利要求1和/或2所述的方法,其特征在于,所述滤纸包括3MM层析滤纸。
4.根据权利要求1、2和/或3任一所述的方法,其特征在于,所述滤纸包括一端连接有滤纸的装置。
5.根据权利要求1、2、3和/或4任一所述的方法,其特征在于,所述滤纸包括一端连接有滤纸的卡纸或纸板。
6.根据权利要求1、2、3、4和/或5任一所述的方法,其特征在于,所述方法还包括下述1)-8)所述中的至少一种:
1)采用MM400混合型研磨仪粉碎研磨样品;
2)粉碎研磨样品2-3min;
3)在每100mg的样品中加入500-1000μl裂解液;
4)将样品进行裂解,裂解时间包括3-5min;
5)在样品中加入裂解液,裂解液的配方为:0.2-0.4mol/L氯化钠,3-4mol/L盐酸胍,质量体积比为2-4%的CTAB或SDS,0.1-0.3mol/L的Tris,0.02-0.03mol/L的EDTA,质量体积比为0.1-0.3%的β-巯基乙醇,质量体积比为1-2%的Triton x-100;
6)将滤纸的一端浸泡入加入了裂解液的样品中;
7)将滤纸的一端浸泡入加入了裂解液的样品中30-60s;
8)将滤纸的一端浸泡入加入了裂解液的样品中后,将滤纸转入到漂洗液A中静置;再将滤纸转入到漂洗液B中静置;最后将滤纸转入洗脱液中静置;所述漂洗液A的配方为:0.5-0.7mol/L NaCl,5-7mol/L盐酸胍;所述漂洗液B的配方为:0.02–0.04mol/L Tris;所述洗脱液的配方为:10-12mmol/L Tris-HCl,1-2mmol/L EDTA。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,当所述方法包括8)所述方法时,所述方法还包括下述1)-6)所述中的至少一种:-
1)以每100mg的样品计,所述漂洗液A的用量为500-700μl;
2)以每100mg的样品计,所述漂洗液B的用量为500-700μl;
3)以每100mg的样品计,所述洗脱液的用量为50-100μl;
4)所述滤纸在漂洗液A中的静置时间为15-30s;
5)所述滤纸在漂洗液B中的静置时间为15-30s;
6)所述滤纸在洗脱液中的静置时间为15-30s。
8.一种用于提取DNA的滤纸装置,其特征在于,所述滤纸装置包括一端连接有滤纸的卡纸或纸板;所述卡纸包括介于纸和纸板之间的硬质厚纸。
9.一种用于提取DNA的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括下述1)-5)中的至少一种:
1)一端连接有滤纸的装置;
2)裂解液;所述裂解液的配方为:0.2-0.4mol/L氯化钠,3-4mol/L盐酸胍,质量体积比为2-4%的CTAB或SDS,0.1-0.3mol/L的Tris,0.02-0.03mol/L的EDTA,质量体积比为0.1-0.3%的β-巯基乙醇,质量体积比为1-2%的Triton x-100;
3)漂洗液A;所述漂洗液A的配方为:0.5-0.7mol/L NaCl,5-7mol/L盐酸胍;
4)漂洗液B;所述漂洗液B的配方为:0.02–0.04mol/L Tris;所述洗脱液的配方为:10-12mmol/L Tris-HCl,1-2mmol/L EDTA;
5)洗脱液;所述洗脱液的配方为:10-12mmol/L Tris-HCl,1-2mmol/L EDTA。
10.权利要求1-8任一所述方法、权利要求8所述滤纸装置、权利要求9所述试剂盒、和/或滤纸,在DNA提取和/或制备用于DNA提取产品中的应用。
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