[发明专利]一种提高玉铃花组织培养容器苗效率的方法

说明书

本发明公开一种提高玉玲花组织培养容器苗效率的方法，包括以下步骤：1）对优选玉玲花种子进行浓硫酸处理，洗净后置入萌发培养基中进行无菌培养，发芽后截取带芽茎段作为外植体；2）将外植体接种到诱导培养基中培养；3）优选带不定芽的愈伤组织，截取后接种到诱导培养基中培养；4）优选无根芽苗接种到生根培养基中培养；5）待根长到4‑5cm时，将组培苗先移栽至以蛭石基质的容器中，通过浇营养液进行过度培养，经过18‑21d的环境适应性驯化后移至以泥炭土为基质的容器中。该方法通过改进无菌外植体获取的途径，改良组织培养基的配置方案，优化组织培养幼苗的训化方法，提高了组织培养容器苗的效率。

技术领域

本发明属于植物种苗繁殖技术领域，具体涉及一种玉铃花的组织培养快速繁育方法。

背景技术

玉铃花(styrax abassia)，野茉莉科，野茉莉属，小乔木或灌木。花朵芳香、树资优美，是一种优良的园林绿化观赏树种。并且，玉铃花花朵可提取芳香油；种子富含油脂可制作润滑油等；木材致密可供制作器具等。目前市场对玉铃花的需求量逐年增加，但苗木供应稀少。

玉铃花种子外皮坚硬透水性差，内皮有一层致密保护膜包裹种胚，造成玉铃花播种育苗周期长且发芽率低。扦插繁殖技术目前成活率较低，且前期需要营建大量的采穗用苗，增加生产成本同时延长了生产周期，难以满足日益增大的市场需求量。王奎玲(玉铃花的组织培养与快速繁殖，植物生理学通讯，2010,9(46),959-960)，李俊卿(崂山野生玉铃花引种与繁育研究，青岛农业大学，2008，36-43)，陈甜甜(玉玲花高效快繁技术研究，时代农机，2017,6(44),109-110)等研究了玉铃花的组织培养技术。

但在实际操作过程中，发现还存在以下问题：(1)从母树上截取的外植体(带芽茎段)表面消毒困难，通过升汞进行灭菌处理时，所用剂量和处理时间较难掌握，污染不易根除的同时易对外植体造成伤害，导致外植体褐化、死亡；(2)不定芽在MS培养基上较易褐化；(3)生根苗直接移栽至土壤中成活率较低；表现为幼苗从实验室环境过渡到适应田间环境的过程中容易死亡，导致玉铃花组织培养方法难以应用于生产。

发明内容

本发明的目的在于克服已有技术的不足而提供一种提高玉铃花的组织培养效率和移栽驯化的方法，该方法通过改进无菌外植体获取的途径，改良组织培养基的配制方案，优化组织培养幼苗的训化方法，提高了组织培养容器苗的效率。因而，本发明提供一种提高玉铃花组织培养容器苗效率的方法，可以提高玉铃花组织快繁效率和移栽成活率，弥补了玉铃花繁殖周期长、效率低的现状，同时也缓解了市场对玉铃花苗木需求的问题。

具体地，本发明提供一种提高玉铃花组织培养容器苗效率的方法，其特征在于通过以下步骤进行：

1)消毒处理玉铃花种子后置于种子萌发培养基中培养；

2)截取萌发的幼苗的带芽茎段作为外植体，在诱导培养基中进行培养；

3)截取带愈伤组织的小不定芽，置入新的诱导培养基中继续继代培养；

4)将无根不定芽定植在生根培养基中进行生根培养。

进一步包括下述步骤，5)将根长达4-5cm的幼苗移植锥形穴盘中，以蛭石为基质，每2-3天浇一次营养液，18-21d后移植到无纺布容器中以泥炭土和珍珠岩(优选比例为2:1)为基质。

其中，步骤1)中所述的种子萌发培养基配制方法：以1/2MS培养基为基础培养基，添加60-80mg/L的赤霉素，60-80mg/L的Vc，10－20g/L的蔗糖，400－600mg/L的活性炭和8－12g/L的琼脂粉，并调节培养基pH值至5.6－6.0，优选为5.8；其中，进一步优选地，赤霉素浓度为60mg/L和Vc浓度在80mg/L，和/或15g/L的蔗糖，500mg/L的活性炭，10g/L的琼脂粉。