[发明专利]一种提高玉铃花组织培养容器苗效率的方法

权利要求书

1.一种提高玉铃花组织培养容器苗效率的方法，其特征在于通过以下步骤进行：

1) 用浓硫酸处理玉铃花种子，清洗后置于种子萌发培养基中培养；其中所述的种子萌发培养基配制方法：以1/2MS培养基为基础培养基，添加60-80 mg/L的赤霉素，60-80 mg/L的Vc，10－20 g/L的蔗糖，400－600mg/L的活性炭和8－12g/L的琼脂粉，并调节培养基pH值至5.6－6.0；

2) 截取萌发的幼苗的带芽茎段作为外植体，在诱导培养基中进行培养；

3) 截取带愈伤组织的小不定芽，置入新的诱导培养基中继续继代培养；

4) 将无根不定芽定植在生根培养基中进行生根培养；

5) 将根长达4-5cm的幼苗移植锥形穴盘中，以蛭石为基质，每2-3天浇一次营养液，18-21天后移植到以泥炭土和珍珠岩为基质的无纺布容器中；

其中，步骤2）和步骤3）中所述的诱导培养基配制方法：以WPM培养基为基础培养基，添加0.03-0.08mg/L的TDZ，0.3-0.8 mg/L的BA，以及蔗糖和琼脂粉，调节培养基pH值至5.6－6.0；

步骤4）中所述的生根培养基配制方法：以1/2WPM培养基为基础培养基，添加0.05-0.1mg/L的IBA，0.03-0.05 mg/L的NAA，1－2mg/L的活性炭和7-8g/L琼脂粉，调节培养基pH值至5.6－6.0；

步骤5）中所述的营养液配制方法：以Hoagland营养液为基础，添加0.005－0.02mg/L的壳寡糖；调节营养液pH值至6.8－7.2。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1）的种子萌发培养基中，添加60mg/L的赤霉素，80 mg/L的Vc，15 g/L的蔗糖，500mg/L的活性炭和10g/L的琼脂粉，并调节培养基pH值至5.8；所述步骤2）和步骤3）的诱导培养基中，添加0.05mg/L的TDZ，0.5 mg/L的BA，以及15 g/L的蔗糖和10g/L的琼脂粉，调节培养基pH值至5.8；所述步骤4）的生根培养基中，添加0.05mg/L或者0.1mg/L的IBA，0.03 mg/L或者0.05mg/L的NAA，2mg/L的活性炭和7-8g/L琼脂粉，调节培养基pH值至5.8；所述步骤5）的营养液中，添加0.01 mg/L的壳寡糖并调节营养液pH值至7.0；步骤5）所述基质为泥炭土：珍珠岩=2:1。

3.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤1）是将种子置入浓硫酸中浸泡0.5－1.5h，倒掉浓硫酸后水冲洗，晾干；随后在超净台中，用70%的乙醇浸泡20－40s，升汞中灭菌，无菌水清洗，接种在种子萌发培养基中，每个培养瓶放置3-4粒种子，4℃低温处理3d后置入组培室中，于下述条件培养：温度25℃，光暗节律为：光16h/d，暗 8h/d，光照强度4000lux。

4.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤2）中是选择萌发10-13d的幼苗，截取0.8-1.2cm的带腋芽的茎段，按植物形态学将下端插入诱导培养基中。

5.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于：调节培养基pH值根据情况采用1mol/L的NaOH或HCl调节至所需pH值。

6.一种用于玉铃花组织培养的培养基，其特征在于：所述培养基是由种子萌发培养基、诱导培养基和生根培养基组成，其中，种子萌发培养基：以1/2MS培养基为基础培养基，添加60-80 mg/L的赤霉素，60-80 mg/L的Vc，10－20 g/L的蔗糖，400－600mg/L的活性炭和8－12g/L的琼脂粉，并调节培养基pH值至5.6－6.0；诱导培养基：以WPM培养基为基础培养基，添加0.03-0.08mg/L的TDZ，0.3-0.8 mg/L的BA，以及蔗糖和琼脂粉，调节培养基pH值至5.6－6.0；生根培养基：以1/2WPM培养基为基础培养基，添加0.05-0.1mg/L的IBA，0.03-0.05 mg/L的NAA，1－2mg/L的活性炭和7-8g/L琼脂粉，调节培养基pH值至5.6－6.0。

7.按照权利要求6所述的培养基，其特征在于：其中，种子萌发培养基：添加60 mg/L的赤霉素，80 mg/L的Vc，15 g/L的蔗糖，500mg/L的活性炭和10g/L的琼脂粉，并调节培养基pH值至5.8；诱导培养基：添加0.05mg/L的TDZ，0.5 mg/L的BA，以及15 g/L的蔗糖和10g/L的琼脂粉，调节培养基pH值至5.8；生根培养基：添加0.05mg/L或者0.1mg/L的IBA，0. 03 mg/L或者0.05mg/L的NAA，2mg/L的活性炭和7-8g/L琼脂粉，调节培养基pH值至5.8。