[发明专利]一种超临界CO2

权利要求书

1.一种超临界CO₂工艺下固定化酶催化制备糖酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对脂肪酶进行酰化修饰：

将溴丙酸溶于乙腈中，加入乙烯基咪唑或丙烯基咪唑，第一次磁力搅拌反应，将得到的反应产物用乙醚萃取，得到下层油状物质，真空干燥，得到修饰剂；将修饰剂与羰二咪唑混合，加入到无水二甲亚砜中，第二次磁力搅拌，室温反应，得到活性体；将活性体加入到脂肪酶液中，第三次磁力搅拌反应，透析，得到酰化脂肪酶溶液；

所述溴丙酸与咪唑类化合物的摩尔比为10:1.1；

第一次磁力搅拌反应的温度为60-100℃，所述第一次磁力搅拌反应的时间为5-10h；所述第三次磁力搅拌反应的温度为0-4℃，所述第三次磁力搅拌反应的时间为8-24h；

所述修饰剂与羰二咪唑的摩尔比为1:1；所述室温反应的时间为2-8h；所述活性体与脂肪酶液的体积比为90μL：5mL，所述脂肪酶液的浓度为150-350μM；

(2)制备固定化脂肪酶：

将单体丙烯酰胺加入到酰化脂肪酶溶液中，搅拌溶解，通氮气，加入过硫酸铵与四甲基乙二胺，进行聚合反应，透析，冻干，得到固定化脂肪酶；

单体丙烯酰胺、酰化脂肪酶溶液与过硫酸铵的用量比为250mg：5mL：15mg，所述酰化脂肪酶溶液中脂肪酶的浓度为40-100mg/mL；所述过硫酸铵与四甲基乙二胺的用量比为15mg：12μL；

所述搅拌溶解的温度为30-60℃，所述通氮气的时间为20-45分钟；所述聚合反应的温度为30-70℃，所述聚合反应的时间为12-24小时；

所述糖与脂肪酸的摩尔比为1：1-1：4；固定化脂肪酶的用量占反应物总量的0.5-12wt％；所述搅拌反应的温度为20-90℃，所述搅拌反应的压力为5-40MPa，所述搅拌反应的时间为2-30小时；

(3)制备糖酯：

将糖与脂肪酸混合，得到反应物，加入固定化脂肪酶，置于反应釜，加入CO₂介质，进行搅拌反应，过滤，得到糖酯。

2.根据权利要求1所述的超临界CO₂工艺下固定化酶催化制备糖酯的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述脂肪酶液中脂肪酶为米曲霉脂肪酶、黑曲霉脂肪酶、米黑毛霉菌脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶、嗜热栖热菌脂肪酶、南极假丝酵母脂肪酶、皱褶假丝酵母脂肪酶或猪胰脏脂肪酶。

3.根据权利要求1所述的超临界CO₂工艺下固定化酶催化制备糖酯的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述糖为单糖或二糖；所述脂肪酸来源于菜籽油、大豆油、花生油、玉米油、蓖麻油、棉籽油、桐油、乌柏油、鱼油、猪油中的一种或一种以上的混合物；所述糖酯为蔗糖酯、果糖酯或葡萄糖酯。