[发明专利]一种茵陈解毒颗粒中绿原酸和栀子苷同时定量测定方法

说明书

本发明涉及一种茵陈解毒颗粒中绿原酸和栀子苷同时定量测定方法。其特征：用简便、快捷的前处理方法得到供试品溶液，采用普通的色谱柱、等度洗脱方式，以体积比为11∶8∶91的乙腈‑甲醇‑0.1％磷酸为流动相，在235±1nm处，同时测定了样品中的绿原酸和栀子苷含量，波峰分离良好，两峰峰面积大小适宜，绿原酸波峰保留时间9分钟左右，栀子苷的保留时间11分钟左右，进样一针，12分钟出峰完毕。实现了定量指标翻倍，监督力度提升，但检测时间和费用并不增加的有益效果。方法简便、快捷、准确、成本低、实用范围广，易于普及掌握。

技术领域

本发明涉及一种茵陈解毒颗粒中绿原酸和栀子苷同时定量测定方法。

背景技术

茵陈解毒颗粒由茵陈、栀子、虎杖、黄芩和钩藤组成，具有清热解毒，疏肝解痉之功效。作为动物用药，主治雏鸭病毒性肝炎。每1g颗粒相当于原生药1.6g。其君药是茵陈、臣药为栀子，原质量标准有茵陈、栀子、虎杖、黄芩的薄层鉴别和茵陈中的绿原酸定量测定，为确保制剂的质量，拟增加臣药栀子苷的定量测定指标。

茵陈解毒颗粒的组方与制备工艺如下：

【处方】茵陈500～550g、栀子250～275g、虎杖278～330g、黄芩250～275g、钩藤278～330g

【制法】取处方中5味中药，加水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约1500ml，加2倍量乙醇，静置(4℃)24小时，滤过，滤液回收乙醇后浓缩至相对密度1.30～1.35(80℃)的稠膏，加蔗糖、糊精适量，混匀，制粒，低温干燥，制得成品1000g。

处方中茵陈为君药，栀子为臣药。茵陈活性成分主要为挥发油、蒿属香豆素、色原酮类、黄酮类、绿原酸等。中国药典2015年版一部绵茵陈项下，就是以绿原酸为定量测定指标，进行质量控制的。栀子主含环烯醚萜类化合物，有4种主要类型：环烯醚萜烷类、环烯醚萜苷类、环烯醚萜二缩醛酯类和裂环烯醚萜苷类。环烯醚萜基本骨架经环氧化、羟基化及由莽草酸途径得到的芳香酸酯化。导致了该类化合物的多样性，同时也导致其药理活性的多样性。其代表性成分有栀子苷，中国药典2015年版一部栀子项下，就是以栀子苷为定量测定指标，进行质量控制的。在本制剂原质量标准中已增订了君药绿原酸的含量测定方法，但鉴于臣药栀子中的栀子苷含量限度是茵陈中绿原酸的3.6倍，所以拟再增订臣药栀子苷的含量测定指标，以达到高标准地控制茵陈解毒颗粒质量的目的。

为提高检测效率，降低检测成本，本着检测指标增加，效率不减、成本不增加的原则，拟将绿原酸及栀子苷采用同一流动相，同时测定。为此查阅文献得知，有关绿原酸和栀子苷的含量测定，多是采用HPLC法的梯度洗脱的方式进行测定^【1.2】，但要求测定仪器必须带梯度洗脱装置，仪器成本提高，测定范围受到设备的限制。仅查阅到一篇采用等度洗脱，测定茵栀黄(粉针)中绿原酸和栀子苷含量的文章^【3】，其流动相的组合是乙腈-0.4％磷酸溶液-四氢呋喃(9∶91∶0.8)。该流动相的最大缺陷是：磷酸的浓度0.4％太高，其酸性在pH2以下(作者曾精密测定过0.1％的磷酸pH值约为2.1)，不符合中国药典所规定的流动相pH值应在2～8的要求，其次含有刺激性的油状液体四氢呋喃，这两点缺陷，都极易造成色谱柱的C₁₈链的随机卷曲，致使色谱柱理论踏板数快速降低、寿命缩短。

在上述背景情况下，为简便、快捷、科学、规范、多指标控制制剂的质量，发明了采用普通的色谱柱及常用的流动相体系、等度洗脱方式，测定了茵陈解毒颗粒中绿原酸和栀子苷含量。

发明内容

采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为11∶8∶ 81的乙腈-甲醇-0.1％磷酸为流动相，采用等度洗脱的方式，在235±1nm处，同时测定了茵陈解毒颗粒中的绿原酸和栀子苷含量，波峰分离良好，两峰峰面积大小适宜，绿原酸波峰保留时间9分钟左右，栀子苷的保留时间11分钟左右，进样一针，12分钟出峰完毕。方法简便、快捷、准确、成本低、实用范围广，易于普及掌握。