[发明专利]一种降低海藻糖浊度的方法

说明书

本发明公开了一种降低海藻糖浊度的方法，属于分离提取技术领域。本发明的方法通过将利用海藻糖合酶转化法制得的海藻糖酶反应液依次经糖化酶酶解、第一次活性炭过滤、弱碱性阴离子树脂过滤、弱酸性阳离子树脂过滤、第二次活性炭过滤、醇滤等步骤处理，成功将海藻糖成品的纯度从78.1％提升至99.8％，浊度从0.06降低至0.001。

技术领域

本发明涉及一种降低海藻糖浊度的方法，属于分离提取技术领域。

背景技术

海藻糖是由两个葡萄糖分子通过α，α-1,1键结合而成的非还原性双糖，广泛存在于细菌、真菌、藻类、低等植物及昆虫中。经研究发现，该糖具有独特的生物学功能，有保护生物大分子，保护细胞膜，保护蛋白质免受冷冻、干燥及渗透压变化等造成的破坏的作用，在食品、医药、化妆品、农业等领域均具有广泛应用。

目前，国内外市场对海藻糖的需求不断扩增，其生产技术也在不断追求进步。早期，海藻糖产品主要通过从酵母细胞中提取，产率低，成本高，工艺复杂，限制海藻糖的应用；近年来，在许多微生物中发现能够一步转化麦芽糖生成海藻糖的海藻糖合酶，该途径不消耗高能物质，不依赖磷酸，且底物麦芽糖价格低，便于获得，与海藻糖相比有较大的价格空间。因此，该途径极有工业化前景。

如中国专利文献CN101831474A(申请号201010137964.2)公开了一种利用恶臭假单胞菌生产海藻糖的方法，包括恶臭假单胞菌培养步骤、β-巯基乙醇处理步骤和发酵步骤。该发明以麦芽糖为底物，通过制备恶臭假单胞菌的透性细胞，利用其细胞内海藻糖合酶将麦芽糖一步转化为海藻糖。经测定，用β-巯基乙醇处理的恶臭假单胞菌透性细胞溶液中约有3％～5％的海藻糖生成。

目前，酶转化法生产海藻糖所获得的酶反应液中除了海藻糖外，还含有麦芽糖、葡萄糖等糖类，此外还有蛋白、色素和金属离子等杂质。因此需要经过系列纯化过程才能得到纯度较高的海藻糖。

但由于酶转化法中的反应液中糖的成分复杂，因此，现有技术中的分离手段并不适用于酶转化法中的反应液。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种降低海藻糖浊度的方法。此方法通过将利用海藻糖合酶转化法制得的海藻糖酶反应液依次经糖化酶酶解、第一次活性炭过滤、弱碱性阴离子树脂过滤、弱酸性阳离子树脂过滤、第二次活性炭过滤、醇滤等步骤处理，成功将海藻糖成品的纯度从78.1％提升至99.8％，浊度从0.06降低至0.001。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种降低海藻糖浊度的方法，所述方法包含如下步骤：

(1)将利用海藻糖合酶转化法制得的海藻糖酶反应液加热至80～100℃，保温10～30分钟，降温，然后加入糖化酶，糖化酶加入量为12～24U/ml，调pH 4.0～7.0，控制糖化温度为60～65℃，酶解时间8～12h，然后升温至80～100℃，保温10～30分钟，过滤，制得海藻糖粗液；

(2)向步骤(1)制得的海藻糖粗液中添加质量占海藻糖粗液总质量0.5％～3％的活性炭，脱色20～60分钟，过滤，得到一次滤液；

(3)在步骤(2)制得的得到一次滤液中添加质量占一次滤液总质量0.5～0.8％的柠檬酸、0.1～0.5％的NaCl以及6～8％的ZnCl₂后依次经过弱碱性阴离子树脂和弱酸性阳离子树脂后进行过滤，得到二次滤液；

(4)在步骤(3)制得的二次滤液中加入质量占二次滤液总质量0.5％～3％的活性炭进行脱色后过滤，脱色20～60分钟，过滤，得到三次滤液；

(5)在步骤(4)制得的三次滤液中加入质量占三次滤液总质量0.3～0.8％的Na₂CO₃、8～12％的乙醇后静置0.5～1.5小时，过滤，得到四次滤液；