[发明专利]一种可植入生物传感器的制备方法

权利要求书

1.一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）生物电化学基底的制备：将生丝浸入碳酸氢钠水溶液中，煮沸30-60分钟，并用去离子水冲洗干净；将获得的脱胶丝在80-100℃搅拌下溶解在氯化钙/乙醇水溶液体系中；随后，用微孔过滤器过滤所获得的均匀溶液，使用透析管透析，并在零下40-80℃中冷冻干燥24-36小时以获得丝素蛋白薄膜；将丝素蛋白薄膜溶解在六氟异丙醇溶液中，在室温下风干12-18小时，得到丝素蛋白；

（2）丝素蛋白膜的共混改性：按质量比7:80-100称取聚苯乙烯-马来酸酐共聚物和丝素蛋白，先将聚苯乙烯-马来酸酐共聚物和丝素蛋白溶于硫氰酸钾水溶液中，再加入3-7wt%的氢氧化钠溶液，于80-100℃下搅拌混合，冷却到室温后，在零下35-40℃静置脱泡4-6h，室温下置于玻璃板上，刮膜，再将其置入凝固浴中固化成型，制得改性丝素蛋白膜；

（3）纳米金导电电极的制备：纳米金测量电极使用电子束冷沉淀蒸发器将纳米金沉积到改性丝素蛋白膜基底中，将沉积后的丝素蛋白膜基底进行裁剪，得到纳米金导电电极；

（4）氧化锌纳米棒阵列的制备：使用电化学沉积法，采用二电极体系，取硝酸锌溶液作为电解液置于水浴锅中恒温70-80℃，将切好的锌箔和纳米金导电电极分别作为电沉积的阳极和阴极接入电路进行电沉积，沉积结束后，将纳米金导电电极取出洗净烘干，得到氧化锌纳米棒阵列；

（5）生物传感器的制备：将10-15mmol二硫代[琥珀酰亚胺丙酸酯]稀释在3-5μL二甲基亚砜中，孵育2-3小时后在氧化锌纳米棒阵列表面上官能化；配制3-5μL浓度为10-15μg/ mL的α-葡萄糖氧化酶抗体并孵育15-20分钟，将葡萄糖氧化酶分子固定在α-葡萄糖氧化酶抗体上，并进一步固定修饰在氧化锌纳米棒阵列表面；然后配制3-5μL浓度为10-15μg/ mL的皮质醇抗体并孵育15-20分钟，将皮质醇抗原分子固定在皮质醇抗体上，并进一步固定修饰在氧化锌纳米棒阵列表面，得到可植入的生物传感器。

2.如权利要求1所述的一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述碳酸氢钠水溶液的浓度为5-20wt%。

3.如权利要求1所述的一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述氯化钙/乙醇水溶液体系中氯化钙和乙醇的摩尔比为1:2，氯化钙/乙醇水溶液体系的总摩尔浓度为1.8-2mol/L。

4.如权利要求1所述的一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，微孔过滤器的规格为0.22-0.24μm，透析管的规格为3.5k分子量截留值。

5. 如权利要求1所述的一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的六氟异丙醇溶液的浓度为1-2g /mL。

6.如权利要求1所述的一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述硫氰酸钾水溶液的浓度为35-40wt%。

7.如权利要求1所述的一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，裁剪后所得纳米金导电电极尺寸为2*8mm，沉积后其未沉积的部分为2*2mm。

8.如权利要求1所述的一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述硝酸锌溶液的浓度为0.002-0.2M。

9.如权利要求1所述的一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，电化学沉积过程中控制电流为0.9-1.1mA，沉积开始4-6h后电化学沉积结束。

10.如权利要求1所述的一种可植入生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述二甲基亚砜的浓度为5-6μg/mL。