[发明专利]一种用于自身免疫病标志物检测的蛋白芯片及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于自身免疫病标志物检测的蛋白芯片，所述蛋白芯片的制备方法包括如下步骤：（1）黑玻片预处理；（2）抗原溶液点样；（3）封闭工艺；制得所述蛋白芯片。本发明蛋白芯片用于检测自身免疫病标志物，应用本公司独创的蛋白芯片技术实现联合检测可以有效地提高检测效率，降低检测成本；本发明人开发了同时包含有抗SSA52抗体、抗SSA60抗体、抗SSB抗体、抗dsDNA抗体、抗U1‑snRNP抗体、抗CENP‑B抗体、抗Histone抗体、抗P0抗体、抗Sm抗体、抗Nucleosome抗体、抗Scl‑70抗体和抗Jo‑1抗体12个指标的蛋白芯片诊断试剂盒，具有快速，高效，低成本等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于检测自身免疫病标志物的蛋白芯片及其制备方法。

背景技术

自身免疫性疾病是免疫系统对自身机体的成份发生免疫反应，造成损害而引发疾病。正常情况下，免疫系统只对侵入机体的外来物，如细菌、病毒、寄生虫以及移植物等产生反应，消灭或排斥这些异物。在某些因素影响下，机体的组织成份或免疫系统本身出现了某些异常，致使免疫系统误将自身成份当成外来物来攻击。这时候免疫系统会产生针对机体自身一些成份的抗体及活性淋巴细胞，损害破坏自身组织脏器，导致疾病。如果不及时有效的加以控制，其后果十分严重：免疫系统的攻击会影响每个人体器官，且通常会终身对其进行攻击；有时还可能同时对身体众多部位造成损伤。早期诊断对管理自免来说非常重要，在早期阶段发现可避免或延迟目标器官或组织发生无法补救的损伤。自身免疫性疾病常见相关指标如下：

(1)抗SSA/Ro抗体

抗SSA/Ro抗体是20世纪50年代在干燥综合征(SS)患者(Ro)血清中发现的自身抗体。SSA/Ro抗原是一种小核糖核酸蛋白，位于细胞核，参与mRNA到翻译活性分子的过程。在1984年，60kDa的蛋白质被认为是核糖核蛋白的组份之一；到1988年，通过免疫印迹法检测在SSA/Ro阳性血清中检测到一个抗52kDa(Ro52)的抗体。但是，SSA/Ro 52不是天然核糖核蛋白颗粒的稳定组份。抗SSA/Ro抗体与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征(40-80％)、也见于系统性红斑狼疮(30-40％)和原发性胆汁性肝硬化(20％)中、偶见于慢性活动性肝炎。此外，在100％的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。

(2)抗SSB/La抗体

抗SSB/La抗体于20世纪70年代在干燥综合征(SS)患者(La)血清中发现的。SSB/La抗原属于小核核糖核蛋白(snRNPs)，由一个48kDa(或51kDa)的磷酸化蛋白质和经RNA聚合酶Ⅲ转录而来的RNAs形成复合物。SSB/La抗原在核质内含量丰富，也见于核仁，约10％的抗原也可出现在细胞质中。SSB/La抗原在体内的功能不太清楚，可能在mRNA翻译活性分子的过程中起作用。抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合征(40-80％)和系统性红斑狼疮(10-20％)的女性患者中。男女比例为1:29。在干燥综合征中常同时出现抗SS-A抗体和抗SS-B抗体。

(3)抗dsDNA抗体(抗双链DNA抗体)

双链DNA主链的柔韧性高于单链DNA，对应抗体亲和力也较高。因而抗dsDNA抗体的亲和力更高,更易与双链DNA结合形成免疫复合物沉积于肾小球基底膜而致病。或者抗dsDNA抗体直接作用于肾小球抗原而造成SLE患者的肾损害。在增殖性狼疮肾炎患者的血清中可检测到高滴度的抗dsDNA抗体，临床表现与抗体的出现时间并不一致，在狼疮发病前多年，抗dsDNA抗体可能就存在于血清中，且抗dsDNA抗体可能对判断SLE的病情起到一定的作用。目前已经明确,抗dsDNA抗体与疾病的活动性有明显的相关性。

(4)抗U1-snRNP抗体(抗核内核糖核蛋白抗体)