[发明专利]一种真核可溶表达家蚕微粒子虫极管糖蛋白的载体及方法在审
| 申请号： | 201810947669.X | 申请日： | 2018-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN108913720A | 公开（公告）日： | 2018-11-30 |
| 发明（设计）人： | 龙梦娴;周泽扬;李春峰;谭瑶瑶;于滨 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/30;C07K14/44 |
| 代理公司： | 重庆乐泰知识产权代理事务所(普通合伙) 50221 | 代理人： | 谭科学 |
| 地址： | 400716*** | 国省代码： | 重庆;50 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 家蚕微粒子虫 极管 糖蛋白 可溶 重组载体 真核 草地贪夜蛾 启动子调控 糖基化修饰 蛋白功能 理论基础 基因 构建 侵染 转染 成功 | ||
1.一种真核可溶表达家蚕微粒子虫极管糖蛋白的载体，其特征在于：所述载体为家蚕微粒子虫NbPTP1基因连入重组质粒pSLI/V5-His的BamHⅠ和XhoI酶切位点而得；所述重组质粒pSLI/V5-His是以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为引物，pIZ/V5-His载体为模板扩增获得插入片段OpIE2-MCS，再将插入片段OpIE2-MCS和中间载体pSLfa1180fa用AscⅠ酶切后连接而得。
2.根据权利要求1所述一种真核可溶表达家蚕微粒子虫极管糖蛋白的载体，其特征在于：所述家蚕微粒子虫NbPTP1基因是以家蚕微粒子虫基因组DNA为模板，SEQ ID NO.3和SEQID NO.4所述序列为引物扩增而得。
3.一种真核可溶表达家蚕微粒子虫极管糖蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：构建含家蚕微粒子虫NbPTP1基因的重组载体，然后转染草地贪夜蛾sf9细胞进行表达，所述含家蚕微粒子虫NbPTP1基因的重组载体由IE2启动子调控表达。
4.根据权利要求3所述一种真核可溶表达家蚕微粒子虫极管糖蛋白的方法，其特征在于：所述含家蚕微粒子虫NbPTP1基因的重组载体为家蚕微粒子虫NbPTP1基因连入重组质粒pSLI/V5-His的BamHⅠ和XhoI酶切位点而得；所述重组质粒pSLI/V5-His是以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为引物，pIZ/V5-His载体为模板扩增获得插入片段OpIE2-MCS，再将插入片段OpIE2-MCS和中间载体pSLfa1180fa用AscⅠ酶切后连接而得。
5.根据权利要求3所述一种真核可溶表达家蚕微粒子虫极管糖蛋白的方法，其特征在于：所述家蚕微粒子虫NbPTP1基因是以家蚕微粒子虫基因组DNA为模板，SEQ ID NO.3和SEQID NO.4所述序列为引物扩增而得。
6.根据权利要求3所述一种真核可溶表达家蚕微粒子虫极管糖蛋白的方法，其特征在于：所述转染草地贪夜蛾sf9细胞进行表达方法如下：将含家蚕微粒子虫NbPTP1基因的重组载体与转染试剂按1∶3比例混合后，添加至草地贪夜蛾sf9细胞中，置于28℃培养，转染6小时后，将无血清、无双抗培养基更换为完全培养基，72小时后收集转染细胞。
7.根据权利要求3～6任一项所述一种真核可溶表达家蚕微粒子虫极管糖蛋白的方法，其特征在于，表达后还包括纯化步骤，具体方法如下：将细胞上清液经0.45μm滤膜)处理后，加入Ni柱中，依次经过平衡、清洗和洗脱步骤后，得到极管糖蛋白NbPTP1单一蛋白条带。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于西南大学，未经西南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810947669.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
