[发明专利]用于鉴定多房棘球绦虫引物对、引物探针组以及他们的应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴定多房棘球绦虫引物对、引物探针组以及他们的应用。本发明提供了特异引物对，由序列2所示单链DNA分子和序列3所示单链DNA分子组成。本发明还保护引物探针组，由特异引物对和特异探针组成；特异探针自上游至下游依次由如下元件组成：区段甲、四氢呋喃和区段乙；区段甲如序列4所示，且3’末端第2位核苷酸被荧光基团修饰；区段乙如序列5所示，且5’末端第2位核苷酸被淬灭基团修饰，且3’末端进行C3 Spacer修饰。特异引物对或引物探针组可用于：鉴定多房棘球绦虫；鉴定待测样本中是否含有多房棘球绦虫。本发明提供特异引物对或引物探针组用于鉴定多房棘球绦虫，操作简便、快速、特异性强、灵敏度高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于鉴定多房棘球绦虫引物对、引物探针组以及他们的应用。

背景技术

多房棘球蚴病(Alveolar echinococcosis,AE)又叫做泡型棘球蚴病、多房性棘球蚴病、泡型包虫病等，是我国最常见的棘球蚴病之一。它是由多房棘球绦虫的中绦期幼虫——多房棘球蚴(该病的病原体)寄生于人和动物等中间宿主的肺、肝和肠等脏器组织而引起的一类危害严重的人兽共患寄生虫病。肝脏是该病的原发器官，临床上病例几乎全部都是肝包囊。多房棘球蚴形成的囊泡外观呈葡萄状，经1～2年的侵润性发育几乎就可以占据整个肝脏，而后向肝脏表面蔓延至其他器官，甚至可以寄生于整个体腔。泡型包囊(“虫癌”)呈侵润性生长，可以像恶性肿瘤一样不断扩散转移至其他部位。该病严重威胁到人类的身体健康，若治疗不及时患者病死率极高，是一种能造成严重后果的人兽共患寄生虫病。

多房棘球绦虫的终宿主常见的是红(赤)狐、藏狐、沙狐、家犬和无主犬、狼、土狼、獾、野猫、家猫等，狐狸和犬是其中最主要的传染源。犬在泡型蚴病的传播过程中扮演着十分重要的角色，在我国的半农半牧地区几乎家家养犬，而且犬的排便区距离居民区很近，这极大的增加了人被虫卵感染的机会。多房棘球绦虫的中间宿主主要是啮齿动物，在我国常见的的啮齿动物包括高原田鼠、乌尔黄鼠、中华鼢鼠、青海田鼠和黑唇鼠兔等，另有有三种常见家畜(藏羊、牦牛和藏猪)等也有泡球蚴感染的报道。

多房棘球绦虫成虫在外观上和细粒棘球绦虫高度相似，但体型更小，长度通常为1.2mm～3.7mm，是带科绦虫中体型最小的虫种之一。虫体大多含有4～5个节片，有时可见含有6个节片的虫体。常见的虫体组成成分：头节、颈节、幼节、成节和孕节。头颈部略呈梨形，头顶部含有顶突和4个吸盘，顶突上有两圈小钩(通常为23～36个)。多房棘球绦虫的生殖孔开口常无规则，但大多数都开口于节片一侧的中前部，睾丸数量为16～36个，整个孕节几乎被子宫完全占据，子宫内含有大量的虫卵(约200个左右)。棘球绦虫的中绦期(续绦期)幼虫称为多房棘球蚴，是由无数形状不规则的白色或糜黄色，彼此界限不清晰的多房型囊泡聚集而成。在适宜中间宿主(如高原田鼠)体内囊泡发育成呈球形或不规则球形，囊泡大小形态很相似(直径0.1cm～0.7cm)，囊泡与囊泡相互交联贯通，囊泡外被机体组织(外膜)包裹。囊泡内含透明囊液和原头蚴的称为育囊；含胶状物而无原头蚴，则叫做不育囊。在田鼠等啮齿动物体内，多房棘球蚴包囊多为育囊；而在不适宜中间宿主(如人)体内常为呈胶团样物质的囊泡群，包囊内含少量原头蚴(原头节)或者甚至无原头蚴。外生性出芽生殖是泡球蚴的主要无性繁殖方式，泡球蚴能不断以侵润和转移方式感染并定居于包囊周围组织，少数也可向内芽生形成隔膜而分离出新囊泡，称为子囊。外生性子囊可以脱离病灶，经体液循环(血液和淋巴液)迁移到其他部位，发育为新的泡球蚴。