[发明专利]一种干细胞培养基及干细胞分离方法

说明书

本发明公开了一种干细胞培养基及干细胞分离方法。所述的干细胞培养基包括以下原料：复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠、蛋白多肽。本发明的干细胞培养基通过复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠和蛋白多肽复合而成，不含有动物血清，可避免而引入外源病毒；本发明的干细胞分离方法易操作，分离效果好，50ml组织最终可获得原代脂肪干细胞6.1×10⁷～6.5×10⁷个，且原代脂肪干细胞活率可达99.1～99.6％。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体是一种干细胞培养基及干细胞分离方法。

背景技术

干细胞(stemcell)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。

目前，脂肪干细胞的分离方法多为胶原酶消化法，导致细胞得率低。而且培养体系多采用含血清培养法，由于血清含有其它动物源成分，使培养体系存在引入外源性病毒的风险，从而使脂肪干细胞在临床应用中存在很大瓶颈。

发明内容

本发明的目的在于提供一种干细胞培养基及干细胞分离方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种干细胞培养基，包括以下原料：复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠、蛋白多肽。

作为本发明进一步的方案：复合维生素的浓度为2-5g/L、胰岛素的浓度为6-15g/L、硫辛酸的浓度为3-7g/L、山茶籽油的浓度为5-15g/L、海藻糖的浓度为13-20g/L、紫苏提取物的浓度为10-20g/L、牛磺酸的浓度为5-10g/L、右旋糖酐的浓度为12-25g/L、倍他米松的浓度为6-14g/L、无机盐的浓度为1-2g/L、碳酸氢钠的浓度为2-6g/L、蛋白多肽的浓度为11-17g/L。

作为本发明进一步的方案：复合维生素的浓度为3g/L、胰岛素的浓度为11g/L、硫辛酸的浓度为5g/L、山茶籽油的浓度为10g/L、海藻糖的浓度为16g/L、紫苏提取物的浓度为13g/L、牛磺酸的浓度为8g/L、右旋糖酐的浓度为22g/L、倍他米松的浓度12g/L、无机盐的浓度为2g/L、碳酸氢钠的浓度为4g/L、蛋白多肽的浓度为16g/L。

一种干细胞分离方法，包括以下步骤：

(1)获取离体组织，所述离体组织为脂肪组织，脂肪组织转移到无菌采集瓶中，1-5℃保存；所述离体组织与所述干细胞培养基混合前采用生理盐水清洗1-3遍，洗去血细胞直至加入生理盐水后脂肪组织悬液澄清无血色；将清洗后的脂肪组织置于100-500r/min转速下离心8-15min，去除下层液体，吸取上层组织块放入培养瓶中，将组织块均匀地铺在培养瓶中，置于33-37℃、7％CO₂的培养箱中培养，40-55min后组织块贴于培养面，即得离体组织；

(2)将上述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中，培养至细胞从所述离体组织中爬出来后刮除离体组织；所述离体组织在所述干细胞培养基培养的第10-15天刮除离体组织；

(3)继续培养置于33-37℃、7％CO₂的培养箱中培养，待培养基中细胞融合度达80-90％时，消化后传代培养；所述传代培养采用干细胞培养基进行传代培养。

作为本发明进一步的方案：所述生理盐水含有质量百分比为2％的青霉素和质量百分比为0.5％的叶酸。