[发明专利]一种测定氨基葡萄糖和硫酸软骨素的方法

说明书

本发明涉及分析化学技术领域，特别涉及一种同时测定保健食品中氨基葡萄糖和硫酸软骨素的方法。本发明采用蒸发光散射检测器提高了氨基葡萄糖和硫酸软骨素的灵敏度，采用酰胺色谱柱保留时间适中，分离度好，且各色谱峰分离较好，基线平稳，峰型好，重复性较好，该方法具有良好的线性关系、精密度、稳定性、回收率，能够准确的同时测定保健食品中氨基葡萄糖和硫酸软骨素的含量，适用于保健食品中氨基葡萄糖和硫酸软骨素的测定，也适用于基葡萄糖或硫酸软骨素原料的测定。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，特别涉及一种测定食品或药品中氨基葡萄糖和硫酸软骨素的方法。

背景技术

氨基葡萄糖是一种从天然甲壳中提取的氨基己糖，是人体及动物体内关节组织中糖蛋白的天然成分，具有消炎止痛、治疗与修复关节软骨组织等作用。目前市场常用的有氨基葡萄糖及其盐酸盐、硫酸钠盐或钾盐。硫酸软骨素是一种从动物软骨中提取的酸性粘多糖，属生物高分子化合物，主要用于主要用于治疗神经性头痛、心绞痛、冠心病,以及骨关节疾病的治疗。近年来，有关硫酸软骨素与氨基葡聚糖、玻璃酸钠等药物联合使用治疗骨性关节炎的报道越来越多，不仅广泛用于保健食品中，还用于医药和日用产品等领域，越来越引起人们的重视，因此，也需要相应的检测方法对这些产品进行有效的质量控制。

目前氨基葡萄糖常用的检测方法有紫外分光光度法(国家药品标准WS1-(X-090)-2005Z)、HPLC-UV法(高效液相-紫外检测)及HPLC-ELSD法(高效液相-蒸发光散射检测)。紫外分光光度法样品需衍生化处理，操作繁琐，稳定性差，重复性差；HPLC-UV法如果不衍生，紫外吸收弱，灵敏度低，而衍生操作繁琐，周期长，稳定性差；HPLC-ELSD灵敏度高，克服紫外吸收弱的特点，但是色谱柱多采用C18柱，几乎无保留，2min左右出峰，分离效果差，也有研究采用氨基色谱柱，但寿命短。硫酸软骨素常用的检测方法有Elson-Morgan法、咔唑法、滴定法(美国和欧洲药典)、HPLC-酶解法(《中国药典》二部2015年版)及HPLC-ELSD法。其中前三个方法存在较明显的局限性，操作繁琐，专属性、准确性差；HPLC-酶解法专属性、准确性好，但是样品处理繁琐，耗时长，酶昂贵，且采用UV检测器，灵敏度低。目前以氨基葡萄糖和硫酸软骨素为原料的保健食品中两个目标成分同时测定主要依据GB/T 20365-2006，仍存在一些不足，紫外检测器，灵敏度低，采用强阴离子C18色谱柱，几乎无保留，分离度差，峰型差，且平衡时间长；流动相采用离子对试剂，配制繁琐。

蒸发光散射检测器(ELSD)作为通用型检测器，不依赖于化合物的光学特性，对非挥发化学组分均有良好的响应，广泛应用于皂苷类、萜类、生物碱类、糖类等中药成分的质量控制。氨基葡萄糖和硫酸软骨素几乎无紫外吸收，可以不经衍生化直接测定，操作简便，灵敏度高。

HILIC(亲水作用色谱)适合于分离在反相色谱柱上不保留的极性化合物，尤其是对强极性碱性化合物的保留能力强，成为研究药物代谢、药物发现和组合化学科学的首选，尤其适用于HPLC-MS及HPLC-ELSD。Amide(酰胺)色谱柱是HILIC系列的首选色谱柱，具有键合相稳定、对高极性化合物保留强、耐宽pH和耐高温、可以合并差向异构体而不损失还原糖等多种优点，适合水溶性的氨基葡萄糖和硫酸软骨素的测定。

现有的国内外标准、专利与论文均没有很好的解决氨基葡萄糖和硫酸软骨素的测定问题，因此需要开发一种操作简便，灵敏度高，重复性好，结果准确的分析方法。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种测定氨基葡萄糖和硫酸软骨素的定性或定量方法，其特征在于，该方法包括：将氨基葡萄糖或硫酸软骨素制得的供试品溶液进行HPLC检测，该HPLC检测使用蒸发光散射检测器，其色谱柱采用酰胺色谱柱，以乙腈和含有弱碱的盐为流动相。

优选地，所述供试品溶液的检测流速为0.7-1.0mL/min，优选为0.8mL/min，柱温为40℃。

具体地，所述盐为甲酸铵、乙酸铵、碳酸铵的一种或几种。