[发明专利]一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明涉及一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCC No.14699，是将BALB/c小鼠用完全弗氏佐剂进行首次免疫，不完全弗氏佐剂进行3次加强免疫，不含佐剂的噻虫嗪完全抗原进行1次冲击免疫，使得BALB/c小鼠获得免疫；将高效价低IC₅₀的获得免疫的小鼠脾细胞通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争ELISA筛选和三次亚克隆，得到的细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体，对噻虫嗪具有较好的特异性和检测灵敏度(IC₅₀值为0.81ng/mL)可以用于食品中噻虫嗪的残留检测。

技术领域

本发明涉及一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

噻虫嗪(Thiamethoxam，TMX)是先正达公司1991年研发的第二代新烟碱杀虫剂；从结构上看，以2-氯-5-噻唑基和甲基作为药效基团是对恶二嗪先导物最理想的修饰结合；从作用靶标看，作为乙酰胆碱受体抑制剂干扰昆虫神经信号传导，方式新颖；从杀虫活性看，比第一代新烟碱杀虫剂活性更强，且使用方式多样化；从作用范围看，它对几乎所有咀嚼式口器和绝大多数刺吸口器害虫均有优良防效，尤其在控制对常规杀虫剂产生抗性的害虫方面优势突出；从安全性看，它对哺乳动物低毒，无致畸、致突变效应。

基于以上优点，近年来噻虫嗪在农业生产中被广泛应用，不仅使许多靶标害虫产生了抗药性，而且其在农产品中的高水平残留对消费者造成了潜在威胁。

噻虫嗪的传统检测方法有气质联用法、毛细管电泳法、高效液相色谱法和毛细管电泳质谱联用法等，然而这些方法的前处理比较复杂、费时，不适用于大量样品的快速检测，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对噻虫嗪的高效、快速的检测方法。

酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，然而，使用酶联免疫法检测噻虫嗪的前提是得到对噻虫嗪具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对噻虫嗪具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。

发明人尝试通过杂交瘤细胞制备噻虫嗪单克隆抗体，但在制备能分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株的过程中，如何制备噻虫嗪半抗原和噻虫嗪完全抗原、如何使小鼠产生强免疫，还需进一步的研究；如何使得制备出的杂交瘤细胞株能够成功分泌出噻虫嗪单克隆抗体，还需进一步的研究；如何使得分泌出的噻虫嗪单克隆抗体特异性强、灵敏度高，也还需进一步的研究。

发明内容

本发明的目的是获得一种能分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株。此杂交瘤细胞株分泌的噻虫嗪单克隆抗体对噻虫嗪具有较好的特异性和检测灵敏度(IC₅₀值为0.81ng/mL)，可以用于建立噻虫嗪的免疫学检测方法，检测食品中噻虫嗪的残留。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株已于2017年9月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14699，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明提供了上述一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包含如下步骤：

步骤1：制备噻虫嗪半抗原及噻虫嗪完全抗原，将获得的噻虫嗪完全抗原制备成弗氏佐剂与不完全弗氏佐剂；

步骤2：将得到的弗氏佐剂通过背部皮下注射，注射进入BALB/c小鼠体内进行多次免疫，首次免疫采用完全弗氏佐剂，加强免疫采用不完全弗氏佐剂；

步骤3：将经过上述免疫过程的小鼠进行采血，通过间接ELISA检测小鼠血清免疫效价和免疫抑制能力，删选出血清中噻虫嗪抗体含量高的获得免疫的小鼠；