[发明专利]一种甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条

权利要求书

1.一种甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条，包括底板(8)和依次设在所述底板(8)上的样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)和吸水垫(7)，其特征在于，所述结合垫(2)上结合有胶体金标记的抗人降钙素检测抗体和胶体金标记的抗癌胚抗原检测抗体，所述分析膜(3)上设有人降钙素检测带T1线(4)、癌胚抗原检测带T2线(5)和质控带C线(6)，所述降钙素检测带T1线(4)、所述癌胚抗原检测带T2线(5)和所述质控带C线(6)上分别包被有抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原捕获抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体，人降钙素和癌胚抗原的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:4所示，所述抗人降钙素检测抗体对应具有如SEQ ID NO:2～SEQ ID NO:3任一所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗人降钙素捕获抗体对应SEQ ID NO:2～SEQ ID NO:3中余下一项所示的氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原检测抗体对应具有如SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:6任一项所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原捕获抗体对应SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:6中余下一项所示的氨基酸序列的抗原表位。

2.一种如权利要求1所述的甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备抗人降钙素检测抗体、抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原检测抗体、抗癌胚抗原捕获抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体；

(2)将抗人降钙素检测抗体和抗癌胚检测抗体用胶体金进行标记，并喷涂在玻璃纤维膜或聚酯膜上，制得结合垫；

(3)将抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原捕获抗体以及羊抗鼠IgG抗体分别包被在硝酸纤维素膜的降钙素检测带T1线、癌胚抗原检测带T2线以及质控带C线上制备得到分析膜；

(4)将样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫裁成合适的尺寸，并依次搭接在底板上，制得甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条。

3.根据权利要求2所述的甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述样品垫的材质为玻璃纤维素膜或聚酯膜。

4.根据权利要求3所述的甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述样品垫为玻璃纤维膜或聚酯膜经样品垫处理液浸泡后于室温、湿度不高于30％的条件下干燥制得，所述样品垫处理液包括0.01M PBS缓冲液，0.1wt％Tween-20,1wt％牛血清蛋白和10wt％蔗糖。

5.根据权利要求2所述的甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的具体步骤为：取胶体金溶液100ml，调节pH至6.5～8.0，依次加入0.5～2mg抗人降钙素检测抗体和抗癌胚抗原检测抗体，室温搅拌1h，用酪蛋白或BSA封闭，12000r/min离心30min，弃上清，用胶体金工作液复溶至70mL，喷涂至玻璃纤维膜上，于室温、相对湿度不高于30％的条件下干燥得到所述结合垫。

6.根据权利要求5所述的甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述胶体金的直径为25～35nm。

7.根据权利要求5所述的甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述胶体金工作液包括1wt％牛血清白蛋白、0.1M Tris-Hcl缓冲液和20wt％蔗糖。

8.根据权利要求2所述的甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体步骤为：将所述抗人降钙素捕获抗体和抗癌胚抗原捕获抗体分别用包被缓冲液稀释至0.5～1.5mg/mL,将羊抗鼠IgG多克隆抗体稀释至1～2mg/mL，然后以1～2uL/cm分别喷涂于人降钙素检测带T1线、癌胚抗原检测带T2线和质控带C线上，于室温、相对湿度不高于30％的条件下干燥。