[发明专利]一株牛支原体及其在疫苗研制中的应用

说明书

本发明公开一种牛支原体分离株，及其在灭活疫苗制备中的应用。通过病原菌分离，16srRNA测序鉴定，确定了一株牛支原体病原，命名为牛支原体CO株。在中国普通微生物菌种保藏管理中心登记保藏，保藏号为：CGMCC No.12656。将上述菌种接种到培养基扩大培养，收获培养物经BEI灭活后与佐剂混合得到牛支原体灭活疫苗。本发明牛支原体灭活疫苗应用安全，对牛支原体引起的肺炎、关节炎及乳房炎有良好的免疫保护效果。免疫牛可获得至少6个月的保护。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体为一种牛支原体及其应用。

背景技术

牛支原体(Mycoplasma bovis)是一类没有细胞壁、介于细菌和病毒之间、能进行自我复制、独立生活的简单和极微小的原核微生物，是感染牛的一种非常重要且很容易被忽视的致病性支原体，其致病力仅次于丝状支原体丝状亚种。有研究证实牛支原体除了可导致犊牛肺炎、关节炎、奶牛乳腺炎外还可引起角膜结膜炎、中耳炎、生殖道炎症、流产与不孕等多种疾病。牛支原体主要存在于牛的生殖道和呼吸道内，是引起牛呼吸道疾病的主要病因，同时还可与其他多种病原协同，造成继发感染。

牛支原体在环境中的抵抗力较强，在避光处可存活数周，在4℃牛奶中可存活2个月，-20℃可存活半年，-70℃或冷冻干燥可存活一年以上。牛支原体的活力随着温度的升高而降低，在4～37℃液体介质中牛支原体的活力不受影响，但是65℃经2分钟即可灭活。

支原体缺乏细胞壁，从而对很多针对细胞壁作用的抗生素不敏感。并且常见的对牛支原体的敏感药物如四环素类、大环保内酷类和喳诺酮类药物等，因为在日常养殖过程中大量使用和滥用，世界各地出现了很多耐药的菌株。因此把抗生素作为有效的治疗手段在很多情况尤其是在多种病原混合感染或者在发病晚期时已经不具有任何意义，并且有数据显示，80％的患有牛支原体肺炎并伴有关节症状的牛群中，抗生素已经失去了明显的治疗效果。因为药物治疗效果不好，并且随着抗生素的泛滥，耐药菌株越来越普遍，再加上市面上没有许可的疫苗可用，因此研制对牛有效和安全的疫苗对养牛业是非常有价值的。目前，本领域鲜有文献披露牛支原体疫苗。专利CN201610031897.3、CN201611053720.X及CN201710231073.5均披露了一种疫苗组合物，其掺入了灭活的牛支原体菌株的全细胞灭活菌苗及其在减少肺炎方面的应用，但均未描述在减少关节炎及乳房炎方面的应用。而且本发明专利疫苗与已公开的疫苗在免疫效果有显著提升。

发明内容

本发明提供了一种牛支原体灭活疫苗的制备方法，该方法包含使牛支原体分离株在适当培养基中生长，收获培养物，经二乙烯亚胺(BEI)灭活后，加入605佐剂混合而成。用于预防由牛支原体引起的肺炎及关节炎。本灭活疫苗额外物质包括一种或多种防腐剂，包括新霉素及制霉菌素等。

在一个实施方案中，牛支原体(Mycoplasma bovis)CO株由牛支原体感染牛的肺脏中分离。经过系统性鉴定，确认该菌株为牛支原体，在牛上的毒力试验与免疫原性试验中证实该菌株毒力及免疫原性较强，可以很好的模拟出牛支原体肺炎、关节炎及乳房炎感染症状。牛支原体于2016年6月21日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCC No.12656。