[发明专利]一种双发射荧光纳米粒的制备方法

说明书

一种双发射荧光纳米粒的制备方法，通过中间连接分子乙二胺，将罗丹明B和聚乳酸‑羟基乙酸共聚物共价连接，制备得到具有荧光发射功能的生物相容性材料罗丹明B修饰的聚乳酸‑羟基乙酸共聚物，然后以荧光生物相容性材料包载荧光示踪剂，制备得双发射荧光纳米粒。本发明涉及的制备方法原料简单易得、反应条件温和，所制备的双发射荧光纳米粒表面光滑完整，粒径分布均匀，稳定性好，具有良好的双荧光发射性能。双发射荧光纳米粒能够实现可视化的监测，可用于临床诊断及药物评价领域，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于纳米制备技术领域，具体涉及一种双发射荧光纳米粒的制备方法。

背景技术

聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)是由乳酸和羟基乙酸按照一定比例聚合而成的高分子材料，其降解产物是乳酸和羟基乙酸，同时也是人体代谢产物。由于其具有良好的生物相容性和生物可降解性、质量稳定、降解速度可调节性，近年来被大量用作微纳米控释、靶向系统的载体材料。

为表征纳米粒在细胞或体内的行为，通常会采用纳米粒包载一定量的荧光染料，从而示踪该纳米粒的转运、分布行为，然而细胞或体内环境复杂，当纳米粒发生包载物释放后，这种方法只能够反映包载物在细胞或体内的分布行为，不能够反映纳米粒载体的分布行为，难以评价微纳米控释、靶向系统的性能。通过对纳米粒载体材料和包载物的双荧光标记可实现对整个纳米粒在细胞或体内性能的评价。

罗丹明B是一类以氧杂蒽为母体的碱性呫吨类染料，具有螺环和开环的互变分子结构，是一类具有强荧光，高激光输出效率的染料，染料的发色团中两个苯环间“氧桥”相连，碳原子与氧原子处于对位，形成一个六元环，分子具有刚性平面结构，使其稳定性增强，容易吸收光而发射长波，从而形成荧光，且能减少分子内的热运动，减少激发态能量损耗，提高荧光发射效率，其在醇溶液中为红色荧光，最大吸收波长552nm，最大荧光波长610nm。由于罗丹明B水溶性好，具有较高的消光系数，较高的荧光良子产率，无毒，容易制备等优点，被广泛应用于分析、生物和医药等领域。

目前尚无关于将罗丹明B化学键合在PLGA上，使PLGA能够在一定的激发波长下发射荧光，并用于制备双荧光纳米粒的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种双发射荧光纳米粒的制备方法，该方法利用化学合成方法将荧光染料罗丹明B化学键合在生物材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物上，使其受到光激发后能够发射荧光，通过使用该材料包载荧光染料香豆素6，进而制备得到能够发射双荧光的纳米粒。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种双发射荧光纳米粒的制备方法，包括以下步骤：

(1)聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解于二氯甲烷中，冰浴、搅拌状态下，依次加入N-羟基丁二酰亚胺、三乙胺、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐，室温反应10～12小时，得到反应液A；将乙二胺的二氯甲烷溶液滴加到反应液A中，室温反应18～24小时，反应结束后，洗涤，过滤，干燥，得到中间体B；

(2)将罗丹明B与1-羟基苯并三唑溶解于无水二氯甲烷中，冰浴、避光、搅拌状态下，加入三乙胺，搅拌均匀后，加入1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐，避光、室温反应8～10小时，得到反应液C，将中间体B的二氯甲烷溶液滴加到反应液C中，避光、室温反应18～24小时，反应结束后，洗涤，过滤，干燥，得到罗丹明B修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物；

(3)将罗丹明B修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物和香豆素6溶解于二氯甲烷中，然后加入到聚乙烯醇水溶液中，得到混合液D，将混合液D在室温、避光搅拌4～6小时，离心、洗涤、干燥，得到双发射荧光纳米粒。