[发明专利]一种猪肺炎支原体活疫苗大规格生产方法

说明书

一种猪肺炎支原体活疫苗大规格生产方法，其特征在于包括猪支原体肺炎抗原制备，冻干保护剂配制，抗原与保护剂的配比与混合分装，大规格疫苗的冻干组成，最后制成猪肺炎支原体活疫苗。该大规格生产方法，能在每个西林瓶(体积为7mL或10mL)中装50或100头份大规格容量，同时最优化每头份抗原效价能达到≥10⁸CCU（国家标准100倍以上），同时安全性好、制备方法简单、降低成本等优点。

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，涉及一种猪肺炎支原体活疫苗大规格生产方法。

背景技术

猪支原体肺炎又称猪气喘病，是由猪肺炎支原体引起的一种接触性慢性呼吸道传染病，广泛存在于世界各地。猪只感染后除导致饲料转化率降低、生长发育不良外，且易继发病毒或细菌感染，造成猪死亡率升高，导致经济损失惨重。疫苗免疫是预防本病最重要的手段。

近年来，猪支原体肺炎活疫苗应用逐步重视和广泛应用，传统生产10头份、20头份装量产品在免疫使用过程中存在频繁稀释操作的步骤。南京天邦生物科技有限公司申请的发明：一种猪支原体肺炎活疫苗50头份产品快速冻干方法，申请号201711096020.3，只报道了50头份的冻干方法，但是没有50头份及以上100头份的大规格整体生产方法的报道。

因此，应对规模化养殖场使用大规格猪支原体肺炎活疫苗的需求，迫切需要大规格50头份、100头份的大规格整体生产方法，同时使产品质量高度稳定，抗原含量达到国家标准100倍以上。

发明内容

解决的技术问题：本发明提供一种猪肺炎支原体活疫苗大规格生产方法，能在每个西林瓶(体积为7mL或10mL)中装50或100头份大规格容量，且每头份抗原效价能达到≥10⁸CCU(国家标准100倍以上)，同时安全性好、制备方法简单、成本降低。

技术方案：一种猪肺炎支原体活疫苗大规格生产方法，包括猪支原体肺炎抗原制备，冻干保护剂配制，抗原与保护剂的配比与混合分装，大规格疫苗的冻干组成，最后制成猪肺炎支原体活疫苗。

上述猪支原体肺炎抗原的制备方法为：1)生产一级种子液制备：从菌种库里面取出猪支原体肺炎活疫苗(168株)菌种，在无菌操作间，无菌打开，用pH值为7.4-7.6的KM₂液体培养基原体积溶解冻干菌种，并按照质量比1:10继代于KM₂液体培养基中，放入37℃恒温培养箱48-72小时，待培养物颜色略微变黄，pH值为6.2-6.8时，收获菌液，纯粹检验合格作为一级种子液；2)重复步骤1)，分别扩大培养制备二级种子液和三级种子液；3)将生产及检验好的三级种子液按照质量比1:10接种于30L种子罐内的KM₂液体培养基中，培养基体积为20L，培养基初始pH值调为7.6，37℃培养，转速设定为100r/min，培养24h、32h、40h、48h、56h各取样1次，pH值为6.2-6.8时，到达要求后收获，经纯粹检验及无菌检验合格后，准备再次放大；4)将30L种子罐内的培养物按照质量比5％-10％接种到300L培养罐内的KM₂液体培养基中，培养基体积为200L，培养基初始pH值为7.6，37℃静置培养24h内pH值、溶氧、葡萄糖水平无明显变化，24h后按照搅拌速度100-150r/min，工作罐压维持在0.06-0.08MPa，通气量维持在100L/min、200L/min、300L/min或一次性通气以维持在饱和浓度的30％-60％，补充NaOH碱液以维持pH值的稳定在7.2，并在补充葡萄糖维持1000mg/L，培养24h后，每间隔8h，取样进行CCU测定，绘制培养物的生长曲线；5)测定培养物在发酵罐培养64-72h时滴度达到10⁹CCU/mL，收获培养物。

上述冻干保护剂含有明胶和蔗糖，其余为蒸馏水，其中明胶含量为1.5wt.％～10wt.％，蔗糖含量百分比12.5wt.％～25wt.％。

优选的，上述明胶含量为3wt.％或6wt.％，蔗糖含量为25wt.％。