[发明专利]用于控制重组胶原羟基化的酵母菌株和方法

权利要求书

1.一种经基因工程化以产生非羟基化胶原的酵母菌株，其包含：

(i)酵母菌株；以及

(ii)载体，其包含胶原的DNA序列；胶原启动子的DNA序列；胶原终止子的DNA序列；选择标记的DNA序列、所述选择标记的启动子的DNA序列；所述选择标记的终止子的DNA序列；选自细菌的复制起点和酵母的复制起点的复制起点的DNA序列；以及与酵母基因组含有同源性的DNA序列，其中所述载体已插入所述酵母菌株中。

2.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述酵母菌株选自由以下组成的组的那些菌株：毕赤酵母属、念珠菌属、Komatagaella、汉逊酵母属、酵母属、隐球菌属及其组合。

3.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述胶原的DNA序列选自由以下组成的组：牛、猪、袋鼠、短吻鳄、鳄鱼、大象、长颈鹿、斑马、美洲驼、羊驼、羊、恐龙胶原及其组合。

4.如权利要求3所述的酵母菌株，其中所述胶原的DNA序列选自天然胶原DNA、工程化胶原DNA和密码子修饰的胶原DNA。

5.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述启动子的DNA序列选自由以下组成的组：AOX1甲醇诱导启动子的DNA、pDF去抑制启动子的DNA、pCAT去抑制启动子的DNA、Das1-Das2甲醇诱导的双向启动子的DNA、pHTX1组成型双向启动子的DNA、pGCW14-pGAP1组成型双向启动子的DNA及其组合。

6.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述选择标记的DNA序列选自由以下组成的组：抗生素抗性的DNA和营养缺陷型标记的DNA。

7.如权利要求6所述的酵母菌株，其中所述抗生素抗性标记选自由以下组成的组：对潮霉素的抗性、对博莱霉素的抗性、对遗传霉素的抗性及其组合。

8.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述载体通过选自由以下组成的组的方法来插入所述酵母中：电穿孔、化学转化和交配。

9.一种用于产生非羟基化胶原的方法，其包括；

(i)提供根据权利要求1所述的酵母菌株；以及

(ii)使所述菌株在培养基中生长一段足以产生胶原的时间。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述酵母菌株选自由以下组成的组的那些菌株：毕赤酵母属、念珠菌属、Komatagaella、汉逊酵母属、酵母属、隐球菌属及其组合。

11.如权利要求9所述的方法，其中所述培养基选自由以下组成的组：缓冲甘油复合培养基(BMGY)、缓冲甲醇复合培养基(BMMY)和酵母提取物蛋白胨右旋糖(YPD)。

12.如权利要求9所述的方法，其中所述一段时间为24小时至72小时。

13.如权利要求9所述的方法，其中所述酵母选自由以下组成的组的那些菌株：毕赤酵母属、念珠菌属、Komatagaella、汉逊酵母属、酵母属、隐球菌属及其组合。

14.如权利要求9所述的方法，其中所述胶原的DNA序列选自由以下组成的组：牛、猪、袋鼠、短吻鳄、鳄鱼、大象、长颈鹿、斑马、美洲驼、羊驼、羊、恐龙胶原及其组合。

15.如权利要求9所述的方法，其中所述启动子的DNA序列选自由以下组成的组：pHTX1组成型双向启动子的DNA和pGCW14-pGAP1组成型双向启动子的DNA。

16.如权利要求9所述的方法，其中所述选择标记的DNA序列选自由以下组成的组：所述抗生素抗性DNA的DNA和所述营养缺陷型标记的DNA。