[发明专利]一种席夫碱型结构的荧光探针及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种席夫碱型结构的荧光探针，其结构式为：其中，R为H、Br或Cl中的任意一种。将硫代氨基脲溶解在无水乙醇中，85‑90℃温度条件下滴加水杨醛溶液，控制内温在75‑80℃加热回流使其充分反应，反应完成后，反应液冷却，进行减压抽滤，过滤掉溶液保留滤饼，用无水乙醇洗涤，干燥后得到固体即为所述的荧光探针，该荧光探针能与D‑3‑羟基丁酸特异性识别产生荧光，采用荧光光谱法检测D‑3‑羟基丁酸时，选择性好，抗干扰能力强，灵敏度高，可制成试剂用于检测血液、体液或尿液中D‑3‑羟基丁酸。

技术领域

本发明涉及一种荧光探针，具体而言，是一种检测D-3-羟基丁酸的荧光探针及其制备方法和应用。

背景技术

糖尿病已经成为继心脑血管疾病和肿瘤之后第三位严重危害人类健康的慢性非传染性疾病。糖尿病酮症酸中毒(DKA)是糖尿病最常见的急性并发症之一，酮体是引起糖尿病酮症酸中毒的物质。人体代谢过程中产生的酮体包括D-3-羟基丁酸(78％)、乙酰乙酸(20％)、丙酮(2％)，D-3-羟基丁酸是酮体的主要成分，在体液中含量高且相对稳定，不受溶血、黄疸、脂血的干扰，能够准确地反映体内酮体含量的水平。研究表明血清中的D-3-羟基丁酸浓度小于0.5mmol/L为正常值,大于1mmol/L为高酮血症，大于3mmol/L为酮症酸中毒。因此，D-3-羟基丁酸可作为糖尿病标记物。

目前临床上诊断糖尿病的方法中最常用的是硝普盐法，其原理是利用亚硝基铁氰化钠与酮体中含量20％的乙酰乙酸发生反应，生成一种紫红色的络合物(熊军，柳文菊.比较2种酮体检测方法在酮症酸中毒早期诊断中的价值[J].国际检验医学杂志，2011，32(04):480-481)。此法虽然操作简便，但检测的标记物乙酰乙酸在体内不恒定，极易产生假阴性而出现误诊的情况。而D-3-羟基丁酸的浓度能够准确地反映体内酮体含量的水平，美国糖尿病协会建议通过定量检测D-3-羟基丁酸的浓度诊断监测酮症酸中毒。

D-3-羟基丁酸已成为糖尿病早期预警及酮症酸中毒(DKA)检测中的重要指标，其浓度的准确定量测定是有效防治糖尿病的关键。科学家设计了多种用于检测D-3-羟基丁酸的方法，如比色法、紫外分光光度法、电化学生物传感器等(马念章，李光，廖静敏.人体内酮体检测技术的研究进展[J].分析化学评述与进展，2005(07):1092-1022)。但是这些检测方法均或多或少存在着不足，比如酶稳定性差、电极制作工艺复杂、检测结果重复性差等，不利于临床检测。因此急需发展一种高效、快速、准确检测D-3-羟基丁酸的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种席夫碱型结构的荧光探针及其制备方法和应用，从而提高D-3-羟基丁酸检测的选择性、抗干扰能力及灵敏度。

为解决以上技术问题，根据本发明的一个方面，提供一种席夫碱型结构的荧光探针，其结构式为：

其中，R为H、Br或Cl中的任意一种。

根据本发明的另一方面，提供一种以上所述的席夫碱型结构的荧光探针的制备方法，包括步骤：将硫代氨基脲溶解在无水乙醇中，85-90℃温度条件下滴加水杨醛溶液，控制内温在75-80℃加热回流使其充分反应，反应完成后，反应液冷却，进行减压抽滤，过滤掉溶液保留滤饼，用无水乙醇洗涤，干燥后得到固体即为所述的荧光探针。

根据本发明的另一方面，提供一种检测D-3-羟基丁酸含量的方法，所述席夫碱型结构的荧光探针用DMSO或乙腈或DMF配制成溶液，浓度为5.0×10^-5mol/L；将上述溶液与含有D-3-羟基丁酸钠的溶液混合，采用荧光光谱法检测针D-3-羟基丁酸的含量。

根据本发明的另一方面，提供了席夫碱型结构的荧光探针在制备检测血液、体液或尿液中D-3-羟基丁酸的试剂的应用。