[发明专利]一种定量检测血浆中5种脂溶性维生素的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种定量检测血浆中5种脂溶性维生素的试剂盒及方法。本发明试剂盒包括脂溶性维生素校准品、同位素混合标准品、脂溶性维生素质控品、仪器质控品、流动相添加剂。本发明采用固相支撑液液萃取法并适配自动移液站，极大的简化了样本前处理方法，结合液相色谱串联质谱法实现了高通量、快速的同时精准检测5种脂溶性维生素的目标。本发明在检测外周血血浆样本时，大约仅需250微升血浆样本就可一次性定量5种脂溶性维生素，且由于前处理方法简单快捷，节省操作时间，根据这些指标能有效诊断和检测人体中脂溶性维生素的含量，及时预防和诊断脂溶性维生素缺乏或过量带来的疾病。因此，本发明在临床、健康检查和科研中具有极高的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种定量检测血浆中5种脂溶性维生素的试剂盒及方法。

背景技术

脂溶性维生素是食品中天然存在的微量营养素，为人体提供和维持必需的和广泛的生理生化功能。为满足人体健康和代谢需求，脂溶性维生素必须从日常饮食中获取。脂溶性维生素溶于有机溶剂而不溶于水的一类维生素，包括维生素A、维生素D、维生素E及维生素K₁。

维生素D又称钙化醇、抗佝偻病维生素，是类固醇衍生物，在人体内主要以25羟基维生素D₂和25羟基维生素D₃的形式存在，是维持正常的钙、磷代谢，因而对骨骼的正常发育有极重要的作用；维生素A又称视黄醇，可促进细胞的增殖和生长，保护各器官上皮组织结构的完整和健康，维持正常视力；维生素E又称生育酚、抗不育维生素，参与脂肪的代谢，维持内分泌的正常机能，使性细胞正常发育，提高繁殖性能；维生素K₁即叶绿基甲萘醌，简称叶绿醌，是凝血维生素。在人体内维持血液正常凝固所必须的物质，参与蛋白质谷氨酸残基的γ-羧化。

通过生物样本(如血浆)的分析以评估一个人的营养状况，从而确定其自身的生理或病理状况。然而，对于脂溶性维生素来说，由于其本身的特点，摄入不足时会导致营养缺乏症，而摄入过量又会引起中毒。另外，脂溶性维生素的每一个种类都拥有不同的构型和活性，以及在生物样本中浓度的不同。这一系列的限制和困难以及对疾病诊断的需求，就促使针对单一或者多个脂溶性维生素检测方法的开发和发展。

目前，脂溶性维生素检测的主要方法为酶联免疫分析法、化学免疫发光法、液相色谱法(HPLC)、液相串联质谱法(LC-MS/MS)等。在免疫法测定分析物的过程中，所使用的抗体也可识别其他维生素的衍生物，且通常抗原抗体的反应无法达到100％。因此，此方法结果差异性较大，特异性较差，在应用于临床检测时的可靠性较差，特别是针对于检测含量较低的维生素。液相色谱法由于其检测限的限制，仅针对于含量较高的维生素测定或单一维生素的测定。

国内现有的试剂盒主要针对于单一的脂溶性维生素，没有针对于多种脂溶性维生素共同检测的试剂盒，且检测方法选择性差。对于现有脂溶性维生素检测方法来说，主要使用蛋白沉淀法与液相萃取法进行样本前处理，耗时时间长，操作繁琐，对人员技术要求高，无法配合自动化使用。

发明内容

为了克服现有试剂盒的不足，本发明旨在提供一种用于液相色谱串联质谱法的高通量、快速的同时精准检测5种脂溶性维生素的技术方法。

第一方面，本发明要求保护一种定量检测血浆中多种脂溶性维生素的试剂盒。

本发明所提供的定量检测血浆中多种脂溶性维生素的试剂盒，包括脂溶性维生素校准品、同位素混合标准品、脂溶性维生素质控品、仪器质控品、流动相添加剂。

所述脂溶性维生素校准品包括(或为)系列浓度已知的由50％甲醇(体积百分含量)溶解的视黄醇、25羟基维生素D₂、25羟基维生素D₃、α-生育酚和叶绿醌混合溶液。

进一步地，所述脂溶性维生素校准品由如下9种溶液组成：