[发明专利]一种定量检测血浆中5种脂溶性维生素的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种定量检测血浆中多种脂溶性维生素的试剂盒，包括脂溶性维生素校准品、同位素混合标准品、脂溶性维生素质控品、仪器质控品、流动相添加剂；

所述脂溶性维生素校准品包括系列浓度已知的由50％甲醇溶解的视黄醇、25羟基维生素D₂、25羟基维生素D₃、α-生育酚和叶绿醌的混合溶液；

所述同位素混合标准品包括含量已知的视黄醇-d5、25羟基维生素D₂-d6、25羟基维生素D₃-d3、α-生育酚-d6、叶绿醌-d7的混合干粉；

所述脂溶性维生素质控品包括浓度已知的由混合血浆溶解的视黄醇、25羟基维生素D₂、25羟基维生素D₃、α-生育酚和叶绿醌的混合溶液；

所述仪器质控品包括浓度已知的由80％乙腈和0.1％甲酸溶解的视黄醇、25羟基维生素D₂、25羟基维生素D₃、α-生育酚和叶绿醌的混合溶液；

所述流动相添加剂是甲酸。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有SLE板；

进一步地，所述试剂盒中还含有深孔板、微孔板、过滤板和热封铝膜；

更进一步地，所述试剂盒中还含有操作说明书；所述操作说明书上记载有权利要求3-7中任一所述方法。

3.一种定量检测血浆中多种脂溶性维生素含量的方法，包括如下步骤：

(a)配制稀释剂、萃取剂和复溶液；

所述稀释剂按照包括如下步骤的方法配制：向权利要求1中所述的同位素混合标准品中加入甲醇复溶，得到中间溶液I；然后将所述中间溶液I与50％异丙醇混合，即得所述稀释剂；

所述萃取剂为正己烷；

所述复溶液按照包括如下步骤的方法配制：将乙腈与水混合，得到中间溶液II；然后将所述中间溶液II与甲酸混合，即得所述复溶液；

(b)将所述稀释剂与待测血浆样本混合后，将所得混合液转移至权利要求1中所述的SLE板中，静置后加入所述萃取剂进行萃取，得到含有脂溶性维生素的萃取液；

(c)用氮气将所述萃取液吹干后用所述复溶液进行复溶，然后经超声、过滤后得到待上机待测样品；

(d)用液相色谱串联质谱仪对所述待上机待测样品和待上机标准品分别进行检测，根据检测结果得出所述待测血浆样本中多种脂溶性维生素的含量；

所述待上机标准品为将权利要求1中所述的脂溶性维生素校准品替代步骤(b)和(c)中的所述待测血浆样本后，按照步骤(b)和(c)进行操作后获得的。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，在配制所述稀释剂的过程中，所述同位素混合标准品与所述甲醇的配比为1.30845μg：1.3mL；和/或

步骤(a)中，在配制所述稀释剂的过程中，所述中间溶液I与所述50％异丙醇的体积比为122μL：50mL；和/或

步骤(a)中，在配制所述复溶液的过程中，所述乙腈与所述水的体积比为80ml:20ml；和/或

步骤(a)中，在配制所述复溶液的过程中，所述中间溶液II与所述甲酸的体积比为1000:1。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(b)中，将所述稀释剂与所述待测血浆样本混合时两者的体积比为1:1；和/或

步骤(b)中，将所述混合液转移至所述的SLE板中后静置时间为15min；和/或

步骤(b)中，用所述萃取剂进行萃取为两次萃取，每次萃取时加入的所述萃取剂的体积为750μL，每次加入所述萃取剂后静置5分钟；和/或

步骤(b)中，用所述复溶液进行复溶时所述复溶液的用量为80μL。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述液相色谱条件中的柱温为45℃；样品池温度为8℃；进样体积为10μL；洗脱时的流速为0.5ml/min。