[发明专利]用于进行蔷薇科植物物种鉴定的片段组合、特异引物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于进行蔷薇科植物物种鉴定的片段组合、特异引物及其应用。本发明提供的引物组合由序列表的序列1‑序列16所示的单链DNA组成。利用本发明提供的特异引物，可开发鉴定蔷薇科植物物种的通用试剂盒，推动植物DNA条形码在社会服务中的应用。

技术领域

本发明涉及一种用于进行蔷薇科植物物种鉴定的片段组合、特异引物及其应用。

背景技术

蔷薇科是经济意义非常重要的被子植物，大量的水果(如苹果、梨、山楂、草莓、桃、李、梅、杏、樱桃等)和观赏植物(如梅花、桃花、樱花、月季、玫瑰、花楸等)属于该科。在北半球的亚热带和温带地区，蔷薇科是大科之一，全世界约2800-3500种，在我国有约950种，一半以上为我国特有。仿冒、张冠李戴等问题，会带来一些经济的纠纷，例如我们市场上的樱桃，实际上是两个不同的物种：樱桃(Prunus pseudocerasus)、欧洲甜樱桃(C.avium)，而市面上售价较贵的“车厘子”实际上是指欧洲甜樱桃，一些商贩将樱桃冒充“车厘子”出售，获取高价利润；花卉市场中贩卖的所谓的“玫瑰”实际上为月季(Rosa chinensis)而并不是玫瑰(R.rugosa)。而解决这些问题的根本在于对蔷薇科植物进行有效的鉴定。

传统的形态学鉴定方法需要基于完整的形态特征，同时需要鉴定人员具有扎实的分类学基础以及丰富的鉴定经验进行鉴定，一旦待鉴定植物形态特征不完整(如碎片、加工过的果实等)则很难鉴定准确。除此之外，植物形态受生长环境影响极大，许多生长在不同生态环境中的同种植物，形态上会发生很大的变异，单纯从形态进行鉴定也是存在一定的误差。因此从DNA分子水平上对植物进行鉴定，是有效解决植物准确鉴定，保障市场公平竞争的迫切需要。

DNA条形码技术(DNA barcoding)是指利用一段标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA序列片段作为标记来实现对物种的快速、准确和自动化鉴别技术。该技术弥补了传统分类方法的不足，能够快速、准确地鉴定物种。在2009年第三届国际DNA条形码会议上，决定将叶绿体基因片段rbcL和matK作为植物DNA标准条形码的核心码，同时建议将叶绿体基因片段trnH-psbA和核基因ITS作为植物DNA条形码的补充码。然而，上述的几个条形码并不能在所有类群中都有较高的分辨率，因此针对不同的类群，还会在此基础上筛选类群专一的DNA条形码片段。而针对蔷薇科植物有效的鉴定方法还未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于进行蔷薇科植物物种鉴定的片段组合、特异引物及其应用。

本发明提供了一种引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)由引物对1至引物对8组成；

(a2)引物对1至引物对8中的任意一个引物对；

(a3)引物对1至引物对8中的任意2个引物对的组合、任意3个引物对的组合、任意4个引物对的组合、任意5个引物对的组合、任意6个引物对的组合或任意7个引物对的组合；

(a1)或(a2)或(a3)中，所述引物对1由引物Ros-matK-F和引物Ros-matK-R组成；

所述引物Ros-matK-F为如下(b1)或(b2)：

(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物Ros-matK-R为如下(b3)或(b4)：

(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物对2由引物Ros-ITS-1-F和引物Ros-ITS-1-R组成；