[发明专利]钠通道阻断剂μ-TRTX-Ca1a作为镇痛药物的应用

说明书

本发明涉及白线霜足蛛毒素μ‑TRTX‑Ca1a的氨基酸序列和基因序列以及应用，属于生物医学领域。μ‑TRTX‑Ca1a含有38个氨基酸残基，其中六个半胱氨酸形成三对二硫键，分子量为4289.31 Da。白线霜足蛛毒素μ‑TRTX‑Ca1a能优先抑制钠离子通道亚型Na_v1.7。白线霜足蛛毒素μ‑TRTX‑Ca1a能够明显的减轻小鼠福尔马林模型、醋酸扭体模型以及热板模型导致的疼痛，μ‑TRTX‑Ca1a能做为一种治疗疼痛的药物。

技术领域

本发明涉及白线霜足蛛多肽毒素μ-TRTX-Ca1a的发现和应用，属于生物医学技术领域。

背景技术

电压门控离子通道是参与细胞电信号传导的跨膜蛋白，是神经、肌肉、腺体等许多组织细胞膜上的基本兴奋单元，它们能产生和传导电信号，其活动与细胞的兴奋、收缩、分泌和突触传递等特异性功能密切相关。在所有哺乳动物钠通道亚型中，Nav1.7，Nav1.8和Nav1.9主要分布在外周神经系统，参与疼痛信号的传导，而Nav1.7是目前缓解慢性疼痛最有前景的目标之一。Nav1.7通道功能获得性突变会导致神经病理性疼痛，包括红斑性肢痛症、阵发性剧痛症、以及小纤维神经痛；相反，Nav1.7的功能缺失性突变会导致非功能性通道蛋白的表达，进而导致先天性无痛症。在药理学上抑制Nav1.7活性的化合物有可能治疗慢性疼痛，因此靶向Nav1.7通道的专一性抑制剂有望发展为新型的镇痛药物。

蜘蛛毒液是一种高度复杂的混合物，主要含有蛋白质、多肽以及一些小分子物质。目前已经证实了这些多肽成分多为神经毒素，可特异性识别离子通道蛋白、膜受体及转运蛋白。因此蜘蛛毒液中的成分具有广泛的应用前途，如开发成为镇痛药物、治疗自身免疫疾病药物等。

发明内容

本发明提供一种白线霜足蛛多肽毒素μ-TRTX-Ca1a的基因、氨基酸序列及其作为镇痛药物的应用。

本发明提供的白线霜足蛛多肽毒素μ-TRTX-Ca1a，是从白线霜足蛛粗毒中通过反向高效液相色谱分离纯化得到的，其氨基酸序列为IFECSISCEIEKEGNGKKCKPKKCKGGWKCKFNICVKV，该多肽包括38个氨基酸残基，分子量为4289.31Da，等电点为9.20，分子内含有三对二硫键，排列方式为C1-C3、C2-C5和C4-C6。

白线霜足蛛多肽毒素μ-TRTX-Ca1a的基因克隆包括：白线霜足蛛毒腺总RNA提取，mRNA纯化，mRNA反转录及cDNA文库构建，设计引物，利用PCR方法筛选白线霜足蛛钠离子通道抑制剂多肽基因。基因测序结果表明编码白线霜足蛛钠离子通道阻断剂的基因由261个核苷酸组成，自5’端至3’端基因序列包括了信号肽、前体肽和成熟肽。

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本发明的白线霜足蛛多肽毒素μ-TRTX-Ca1a，对电压门控钠通道Nav1.7有非常显著的抑制作用，是一种钠通道抑制剂。同时，小鼠的镇痛模型表明该多肽具有良好的镇痛效果。

附图说明

图1：多肽毒素μ-TRTX-Ca1a的分离纯化。A：白线霜足蛛粗毒C18反相HPLC分离纯化，其中星号所示为目的峰。B：目的多肽进一步采用反相HPLC分离。C：目的分子的质谱鉴定图。