[发明专利]可提高卵巢颗粒细胞活性的蒲公英提取物的制备及其应用

说明书

可提高卵巢颗粒细胞活性的蒲公英提取物的制备及其应用，以干燥蒲公英为原料，通过提取、浓缩、酸化、上柱、纯化等得到蒲公英提取物。本发明制备的蒲公英提取物经实验表明：能使卵巢中颗粒细胞数量增殖；能使卵巢中颗粒细胞中FSHR、LHR、IGFR、CPY19A1mRNA表达的受体量显著增加、并促进卵巢中E2、P激素分泌增强；减少临床用药量及减少对促卵药的耐药性有显著效果。以上三方面，实验表明蒲公英提取物提高卵巢颗粒细胞活性中，其差异显著具有统计学意义（P＜0.05）。

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种可提高卵巢颗粒细胞活性的蒲公英提取物的制备工艺及其应用。

背景技术

蒲公英是一味珍贵的中草药，在我国分布和应用都非常广。别名有婆婆丁，黄花丁等，是菊科多年生菊科植物，主产分布于北半球温带和亚寒带地区。味苦，性寒，归肝胃经。具清热解毒，消肿散结，利胆利尿功效。用于疔疮肿毒，乳痈，瘰疬，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛。国外对药用蒲公英的化学成分研究比较全面，主要含黄酮、倍半萜和三萜类成分，具有抗菌、抗炎、抗肝损伤、抗肿瘤、抗氧化等多种生物活性。蒲公英及其制剂在临床上常用于上呼吸道感染、胆囊炎和急性黄疸性肝炎、乳腺炎、胃炎、消化道溃疡和阑尾炎等疾病。对丘脑下部，脑垂体为中心的性激素有激活作用，增加小鼠脾淋巴细胞的增殖，对体外培养心肌细胞有保护作用，增强机体免疫功能，抗毛囊蠕性螨活性，抗疲劳等药理作用。

卵巢是雌性动物生殖系统的重要生殖器官，具有两方面的重要作用，一是产生成熟卵子，二是分泌类固醇激素。颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞，也是卵巢所分泌雌激素，孕激素的重要合成场所。颗粒细胞的增殖和分化可作为卵泡发育的标志。颗粒细胞是成熟卵泡中最大的细胞群、女性体内惟一表达的细胞，卵母细胞的代谢都需要通过颗粒细胞满足。通过间隙连接从周围的颗粒细胞媒介中摄取小分子代谢物如能量底物、核苷酸和氨基酸等。

当今社会推迟生育现象普遍，高龄不孕成为一种社会问题，越来越多的女性寻求辅助生殖技术助孕。但随着生育年龄的增长，女性卵巢功能逐渐衰退，而体外受精治疗的成功依赖于高质量的卵子和精子，有效的超促排卵非常必要。卵巢低反应即是超促排卵过程中出现的卵巢对促性腺激素刺激反应不良的一种病理状态，促性腺激素用量多，但发育的成熟卵泡数量少、水平低，最终导致妊娠结局不良。卵巢低反应发生率占治疗妇女的9%～24%，周期取消率高达76%，而妊娠率则低至3.2%～14%，是目前困扰临床医生的最棘手难题之一。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种可提高卵巢颗粒细胞活性的蒲公英提取物的制备工艺及其应用，并增加卵泡局部刺激激素的分泌，提高卵巢对于促排卵药物反应，降低用药剂量，从而改善临床用药量及耐药性的重要途径。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种可提高卵巢颗粒细胞活性的蒲公英提取物的制备工艺，以干燥蒲公英为原料，通过提取、浓缩、酸化、上柱、纯化得到蒲公英提取物，具体工艺步骤如下：

（1）蒲公英提取：将干燥蒲公英浸泡至溶剂纯净水中进行水煎，纯净水的质量为蒲公英全草的15～20倍，水煎提取的温度控制在90～100℃，水煎次数为2次，每次3小时，然后将两次得到的提取液合并，然后将提取液通过120目滤网过滤，得滤液；

（2）浓缩：将滤液进行减压浓缩，除去溶剂，浓缩可溶性固形物为40%～45%，从而得到蒲公英浓缩液；

（3）酸化：将2%质量浓度的盐酸加入至蒲公英浓缩液中，调PH至3～4，然后静置24小时后进行离心，得到蒲公英上清液；

（4）上层析柱洗脱：将蒲公英上清液进行柱层析，采用DE-52纤维素，20mmol/ltris溶胀，用PH计调PH为8，使用20mmol/ltris洗脱柱子直到流出来的液体不再变色为止，再用3mol/l氯化钠洗脱柱子，用纯净水洗脱至电导率为≤10us/cm，最后再用0.2mol/l氢氧化钠洗脱，氢氧化钠洗脱得到的液体进行浓缩；