[发明专利]一种基于酶法自黄柏中提取小檗碱的工艺

说明书

本发明提供一种基于酶法自黄柏中提取小檗碱的工艺，所述工艺包括如下步骤：(1)将黄柏与水混合，并调节体系pH，得料液；(2)将甘露聚糖酶加入料液中进行反应，完毕后进行离心，取上层清液；(3)将上层清液盐析后分离，并干燥分离物，得小檗碱提取物。所述工艺通过采用甘露聚糖酶能够专一且高效地破坏黄柏细胞壁，有利于对黄柏中小檗碱的充分分离和提取，从而最大程度地保留小檗碱的含量与活性，且操作步骤简单，有利于规模化生产。

技术领域

本发明属酶法提取领域，具体涉及一种基于酶法自黄柏中提取小檗碱的工艺。

背景技术

小檗碱属于季铵型异喹啉类生物碱，是黄柏的主要有效成分之一，其含量的高低是判断黄柏生药及其产品质量的重要指标。小檗碱能溶解于冷水，略溶于冷乙醇，在热水或热乙醇中溶解度比较大。小檗碱对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、淋球菌和弗式、志贺氏痢疾杆菌等均有抗菌作用，大量的文献报道小檗碱在治疗癌症、炎症、传染性疾病、心血管以及代谢性紊乱等方面有疗效。

目前小檗碱提取方法主要包括：稀硫酸法、石灰乳法和乙醇浸提法。稀硫酸法主要利用小檗碱的硫酸盐在酸性环境中溶解，然后加入盐酸再转化为盐酸盐析出；石灰乳法主要是通过增加细胞壁通透性使得游离生物碱溶解于水，再通过盐析和调节酸度等步骤提取分离小檗碱；乙醇浸提法根据小檗碱易溶于热乙醇而难溶解于冷乙醇的性质，以热乙醇为溶剂将其提出，然后再转化为盐酸盐析出。这三种方法虽然简便，但是极易对环境造成污染，且提取率低，限制了推广。

而若采用酶法提取，则可使得提取产率大为增加，酶是以蛋白质形式存在的一类特殊的生物催化剂，某些酶可以在常温、常压和温和的酸碱条件下，将植物细胞壁分解，较大幅度提高天然植物中有效成分的提取率，改善生产过程中的滤过速度和纯化效果，提高产品纯度和制剂的质量。利用酶反应所具有高度专一性的特点，选择相应的酶，可有效将细胞壁水解或降解，破坏细胞壁结构，使细胞内的成分溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取目的，且有利于提高成分的提取率。

公开号为CN102807565A的专利提出一种提取黄连素的改进方法，步骤为先将黄柏进行粉碎、然后腾冲、再和酶反应、采用石灰乳浸提、然后沉淀结晶、干燥。所述改进方法利用纤维素酶降解细胞壁，使细胞壁受到不同程度的破坏，以增加细胞的通透率，提高细胞中活性成分的浸提率。但所述改进方法受限于纤维素酶与底物黄柏作用的酶解率，使黄柏细胞壁受到的破坏有限，且后续工艺繁琐，造成了小檗碱的损失。故需进一步研制自黄柏中提取小檗碱的工艺。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于酶法自黄柏中提取小檗碱的工艺，所述工艺能够专一且高效地破坏黄柏细胞壁，分离黄柏中的小檗碱，最大程度地保留小檗碱的含量与活性，且操作步骤简单，有利于规模化生产。

本发明的技术方案为，提供一种基于酶法自黄柏中提取小檗碱的工艺，包括以下步骤：

(1)将黄柏与水混合，并调节体系pH，得料液；

(2)将甘露聚糖酶加入料液中进行反应，完毕后进行离心，取上层清液；

(3)将上层清液盐析后分离，并干燥分离物，得小檗碱提取物。

植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和木质素组成。甘露聚糖属于半纤维素，不同于其他成分，其在植物细胞壁中以穿插状态分布，通过多个位点与木质素以共价键形式键合，并以氢键形式包裹在纤维素周围。由于酶解具有专一性，故当加入甘露聚糖酶进行反应时，其能针对地分解黄柏细胞壁，快速释放细胞内部物质的同时亦不会对其造成负面影响，这可使得提取率大大提高。

优选地，步骤(1)中，所述黄柏经粉碎，粒度为40～150目。

优选地，步骤(1)中，所述水与黄柏重量比为3～10:1。

优选地，步骤(1)中，所述调节体系pH为以氢氧化钠或者碳酸钠调节体系pH至5～9。