[发明专利]一种天麻伴生蜜环菌栽培种快繁方法

说明书

本发明公开了一种天麻伴生蜜环菌栽培种的快繁方法，实现38天结束母种—栽培种的全过程；过程中液‑液菌种结合，分三个阶段制备蜜环菌栽培种；蜜环菌栽培种能从水浸渍状态转化为膏状、污染率低至2%，栽培种常温避光保存可达1年。该技术的培养基成分简单、易标准化，同时操作过程简单且菌种培养时间短，解决了天麻伴生蜜环菌栽培种的制种慢与污染率高的技术难题，具有很大的应用和推广价值。

技术领域

本发明涉及农业科技种子生产技术领域，尤其是一种天麻伴生蜜环菌栽培种快繁方法。

背景技术

蜜环菌系伞菌目、膨瑚菌科、蜜环菌属的兼性寄生性真菌，广泛分布于世界各地。它是一类具有重要经济价值的高等真菌，不仅具有清目、利肺、益肠胃、抗痉挛、镇静、扩张血管、降血压等药理作用，且子实体、菌丝、菌索都可以入药。此外，名贵中药猪苓和天麻必须依靠蜜环菌提供营养才能生长繁殖。

目前全球通过互交不育性实验鉴定的蜜环菌生物种多达40种，我国鉴定的蜜环菌生物种约有15种，主要分布在东北、华中、西南地区，为Armillaria.gallica、Armillaria.ostayae、Armillaria.tabescens、Armillaria.mellea、Armillaria.sinpina、Armillaria.borealis、Armillaria.gallica、CBC C、CBC F、CBC G、CBC H、CBC J、CBC N、CBC O、CBC P。不同的蜜环菌生物种，甚至是不同的菌株间对天麻的促生作用是有很大区别的。自兰进（2000）公开发表论文阐述蜜环菌A9具有较好的天麻促生作用后，市场上普遍应用栽培天麻的蜜环菌菌株多为A9，少有其它优良菌株出现如京234、GZA46等，且蜜环菌栽培种市场混乱，多为相互引种，没有自己的菌种知识产权。

同时天麻伴生蜜环菌栽培种制作技术相对于其他食用菌较为落后，菌种厂多采用母种、原种、栽培种的固体菌种转接生产方式，活力好的菌株从母种到栽培种长满袋至少要4个月，且污染率较高达10%。以天麻产区贵州为例，省内仅两大天麻主产区大方县、德江县每年的蜜环菌需求量约在400万瓶以上，且优良菌种供不应求，而省内被认可的蜜环菌厂家仅有2家。建立优良天麻伴生蜜环菌的高效、快繁方法，减少栽培种污染率，节约菌种生产成本，从源头上降低麻农投入是天麻产业稳步发展的根本。

本专利发明的天麻伴生蜜环菌快繁技术，分三个阶段制备蜜环菌栽培种、38天即可完成整个过程；采用蜜环菌液体菌种制备栽培种，同时水封栽培种培养基，使栽培种污染率降低至2%；同时生产的蜜环菌栽培种常温避光保存可达1年。该技术使天麻伴生蜜环菌的工厂化生产与应用真正成为可能，解决了天麻伴生蜜环菌栽培种的制种慢与污染率高的技术难题，具有很大的应用和推广价值。

发明内容

本发明的目的是，提供一种天麻伴生蜜环菌栽培种的快繁方法，实现38天结束母种—栽培种的全过程；过程中液-液菌种结合，分三个阶段制备蜜环菌栽培种；蜜环菌栽培种能从水浸渍状态转化为膏状、污染率低至2%，栽培种常温避光保存可达1年。

本发明是这样实现的，包含以下步骤：

1）液体培养基制作：按葡萄糖40g/L、无水乙醇28g/L、酵母粉6g/L、蛋白胨12g/L、硫酸镁2g/L、磷酸二氢钾1g/L、VB₁ 0.01g/L、VB₂ 0.03g/L的配制比例准确称取上述物质煮溶于自来水中，定容后按150ml的量分装于三角瓶中（体积250ml），用透气封瓶膜封口后进行高压灭菌（121℃、20min），冷却后取出备用。