[发明专利]一种胸腺法新的制备方法及其药物组合物

说明书

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种胸腺法新的制备方法及含有胸腺法新的药物组合物，该制备方法采用葡聚糖G型凝胶和氰基硅烷键合硅胶洗脱；采用本发明方法纯化的胸腺法新中，测定的杂质[D‑Ser1]‑胸腺法新和[D‑Asn28]‑胸腺法新均小于0.07％；本发明所述组合物制得的冻干粉针剂溶解性好、稳定性好、复溶性好；由该组合物制得的冻干粉针剂使用方便，利于贮运，其制备方法简单，易于工业化生产，且生产成本低。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及胸腺法新的制备方法及含有胸腺法新的药物组合物。

背景技术

胸腺法新(Thymosin α1，又称胸腺素α1)，分子式为C₁₂₉H₂₁₅N₃₃O₅₅，是由28个氨基酸组成的多肽，相对分子质量为3108.28，为白色或类白色粉末，其氨基酸组成序列为N-Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH。

80年代初美国的Merrifield等实验室人工合成了胸腺法新，目前，美国Sciclone和意大利Sclavo SPA的胸腺法新产品，已在意大利等多个国家上市，商品名为Zadxin(日达仙)，早在上世纪末就已进入中国市场。

中国专利CN201210052504公开了一种胸腺法新的纯化方法，具体步骤包括活性炭吸附过滤、中性氧化铝色谱柱分离、超滤膜浓缩、乙醚沉降离心洗涤、干燥。

中国专利CN201110186259采用反相C18填料，依次采用0.1％TFA/乙腈、0.2％磷酸/乙腈和水/乙腈分别对胸腺法新粗肽进行第一次、第二次纯化和转盐制备。产品冻干后纯度达99％以上。

中国专利CN200910304817提供了一种胸腺法新脱盐工艺。其工艺步骤为：将酸化后的胸腺肽α1溶液与阳离子交换树脂混合后先用水洗脱离子交换树脂，再用碱性溶液洗脱交换树脂，收集在230nm波长处有吸收的洗脱液，最后经浓缩干燥，得胸腺法新。具有样品处理量大，脱盐效率好，可重复上样，适合于工业化大生产的特点。

现有胸腺法新的固相合成过程中，由于合成步骤较多，加入的原料数量较多，造成产物杂质种类比较多，已知的杂质包括：D-Asn28-胸腺法新、Asp28-胸腺法新、di-Ala4-胸腺法新等，未知杂质还有很多。

胸腺法新是一种多肽，对酸碱度、温度等都很敏感，且在水中的稳定性差。为了增加胸腺法新制剂的稳定性，临床上将其制备成冻干粉针，且要求在2～8℃条件下保存，但注射用胸腺法新在生产环节上，需要使用2～8℃的注射用水配制灌装才能保证制剂的质量。

中国专利申请201110220652公开了一种含有胸腺法新的药用组合物及其制备方法，该药物组合物含有以下成分：胸腺法新、甘露醇、山梨醇0.01M醋酸-醋酸钠缓冲溶液调节pH至3.8～4.2，但是正常人体血液的pH值为7.35～7.45，在此范围外的溶液会对血管内皮细胞造成损伤，并诱发血小板聚集和激发的血栓性静脉炎的链式反应。

发明内容

为解决上述现有技术中所存在的问题，我们进行了大量的试验探索，发现添加磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液以及一定比例的聚右旋糖和甘氨酸可以明显提高胸腺法新注射制剂的稳定性。

具体而言，本发明提供了：

一种胸腺法新的纯化方法，包括以下步骤：

步骤1：将胸腺法新粗品溶解在磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液缓冲液中，以葡聚糖G型凝胶为固定相，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液为流动相，收集目的峰获得第一洗脱液，冻干；