[发明专利]生产重组腺病毒的方法

说明书

本申请提供生产重组腺病毒的方法，包括：将重组腺病毒包装细胞工作细胞库的细胞扩增，将扩增的细胞接种到填充床生物反应器进行再扩增，收获再扩增的重组腺病毒。还提供了填充床生物反应器在生产重组腺病毒中的用途。

技术领域

本发明属于生物制药领域，涉及制备重组腺病毒的方法，尤其涉及重组腺病毒基因治疗产品GMP大规模生产的方法和工艺。

背景技术

经过几十年的研究和发展，基因治疗领域已有了长足的发展，并实现了产品突破。中国深圳赛百诺基因技术公司的今又生重组腺病毒p53产品、荷兰UniQure公司的Glybera重组腺相关病毒(AAV)产品和美国Spark Therapeutics公司的Luxturna重组腺相关病毒(AAV)产品已先后获得政府医药监管机构的批准而上市，给患者和社会带来了福音和效益。传统的实验室基因治疗产品的制备方法已不能满足基因治疗产品GMP大规模产业化的要求。迫切需要开发能满足GMP生产技术要求并经济有效的大规模生产方法和工艺。

发明内容

本申请的一个方面提供了生产重组腺病毒的方法，包括：将重组腺病毒包装细胞工作细胞库的细胞扩增，将扩增的细胞接种到填充床生物反应器进行再扩增，收获再扩增的重组腺病毒。

本申请的另一个方面提供了填充床生物反应器在生产重组腺病毒中的用途。

附图简述

图1表示重组腺病毒大规模生产方法和过程的流程图。

图2为表示填充床生物反应器(例如，CelliGen plus,New BrunswickScientific,Co.Inc.USA)的结构(a)和工作原理(b)；其中：(A)加入培养基；(B)收获；(C)可调节的收获水准管；(D)无细胞培养基；(E)充气的培养基使盘床饱和；(F)通气室中筛选的气泡；(G)引流管；(H)纤维床篮；(I)PBS收获；(J)进入空气；(K)轴承箱；(L)叶轮端口；(M)分布器管线；(N)水套；(O)聚酯盘；(P)无细胞流出物；(Q)培养基计算；(R)水套水流出；(S)水套水进入。

图3(a)和图3(b)为表示Fibra-Cel Disks的高清结构。

图4为根据本申请的一个实施方案的方法的流程图。

具体实施方式

在本申请的一个实施方案中，提供了生产重组腺病毒的方法，包括：将重组腺病毒包装细胞工作细胞库的细胞扩增，将扩增的细胞接种到填充床生物反应器进行再扩增，收获再扩增的重组腺病毒。

在一个实施方案中，填充床生物反应器为CelliGen plus(New BrunswickScientific,Co.Inc.USA)或者iCELLis(Pall Corporation，USA)。

在一个实施方案中，重组腺病毒的生产细胞是具有贴壁生长特性的克隆细胞。

在一个实施方案中，重组腺病毒的生产细胞是具有贴壁生长特性的SBN-1293克隆细胞。

在一个实施方案中，填充床生物反应器的填料包括聚酯和聚丙烯。

在一个实施方案中，填充床生物反应器的填料包括聚酯网和聚丙烯支撑架。

在一个实施方案中，所述方法还包括将收获的重组腺病毒进行以下一个或多个：过滤、浓缩、核酸酶处理和离子交换层析纯化。

在一个实施方案中，采用切向流微滤和/或切向流超滤系统对重组腺病毒溶液进行过滤。

在一个实施方案中，采用阴离子交换柱层析纯化重组腺病毒。

在一个实施方案中，采用Sepharose Q XL树脂或Source Q树脂纯化重组腺病毒。