[发明专利]田鼠巴贝虫2D97抗原蛋白及其应用

说明书

本发明公开一种田鼠巴贝虫2D97抗原蛋白及其应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，其编码基因序列如SEQ ID NO：1所示。本发明获得了田鼠巴贝虫的免疫反应谱，发现在特异性IgM抗体反应中，唯一筛选到一个与早期的3dpi和7dpi的鼠血清呈现较高的免疫反应的抗原蛋白2D97，可以作为早期诊断抗原的候选。利用该抗原蛋白2D97的核苷酸序列进行了大肠杆菌原核表达，成功得到了它的重组蛋白，其在特异性IgM抗体的蛋白芯片分析中呈现出与早期的3，7dpi鼠血清有较高的免疫反应，能够用于田鼠巴贝虫感染3～7天的早期和/或窗口期的检测或诊断。

技术领域

本发明涉及分子、细胞、蛋白质组学和免疫学研究领域，具体涉及田鼠巴贝虫免疫蛋白的制备和免疫反应谱的获得，以及在候选诊断抗原和免疫保护疫苗筛选中的应用。

背景技术

巴贝虫病是由巴贝虫属原虫寄生在红细胞内所致的人畜共患的寄生虫病，通过蜱叮咬和输血进行传播。从野生动物和家畜分离的巴贝虫有一百多种，其中有感染人的病例报道的主要包括：B.microti和相关病原，B.divergens和相关病原,B.duncani和相关病原,B.venatorum。在2011年1月，巴贝虫病被列入国家法定传染病。在美国，大多数巴贝虫病例都是田鼠巴贝虫引起的，有报道在1979年到2009年间，162例输血相关的巴贝虫病例中有159份的病原体被鉴定是田鼠巴贝虫，田鼠巴贝虫是人类巴贝虫病的一个主要病原体。人感染巴贝虫后的表现差异较大，在健康人中，大多呈现隐性感染；而在免疫缺陷病人中，如脾切除，HIV患者，老人和孩子等则会病情严重甚至死亡。

目前，巴贝虫病的诊断方法包括：镜检血片，抗体检测和PCR检测及转接试验动物，但是，各检测方法有相对的局限性。吉氏染色外周血涂片的油镜检查是巴贝虫病诊断的金标准，但通常情况下外周红细胞感染百分比较低，而且形态与疟原虫属相似；PCR技术具有很高的敏感性和特异性，但不适用于低密度虫血症和窗口期样本的检测；抗体的检测具有很高的敏感性，也适用于低密度的感染样本的检测，但是它同样不能对窗口期的样本进行有效检测，而且在虫血症清除之后，抗体仍然会持续相当一段时间而呈现假阳性。由于田鼠巴贝虫病的自限性和当前检测手段的局限性，在疾病筛查中非常容易被误诊或漏诊，以至造成血制品的污染而形成疾病输血性传播。现有诊断抗原的缺陷在于，无法检测感染早期(窗口期)的样本，也无法反应感染从急性期转入慢性期的疾病进程，比如目前文献报道中具有诊断效果的抗原BmSA1、BmP94、BmIRA、BMN1-8、BM1542、Bm186等。

研究表明，抗体水平的检测对于隐性感染病例的筛查具有重要意义，在急性感染阶段，IgM抗体最先产生并对寄生虫做出响应，而特定的IgG则与寄生虫数量的减少有关。然而，在巴贝虫病的感染进程中，感染早期(窗口期)的样本不能有效检测，感染从急性期转入慢性期的过程中，抗原谱/免疫反应谱目前尚不清楚，疾病进程得不到监测。通过免疫反应谱了解巴贝虫病的疾病进程，筛选能够反应疾病进程的标志性抗原，对发展一种通量高，快速、敏感的田鼠巴贝虫诊断试剂以满足疾病检测和筛查的需求非常重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，针对目前田鼠巴贝虫病检测的局限性，提供一种或多种田鼠巴贝虫的标志性抗原及其联合抗原，能够检测感染早期和/或窗口期的样本，能够反应疾病从急性期转入慢性期的进程，能用作田鼠巴贝虫诊断试剂并具有通量高、快速、准确的特点，可以满足疾病检测和筛查的需求。

本发明提供了一种分离的基因，可编码田鼠巴贝虫2D97抗原蛋白，其序列如SEQID NO：1所示。

本发明提供一种田鼠巴贝虫2D97抗原蛋白，由上述的分离的基因编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明提供了一种分离的基因在制备治疗、诊断或者预防田鼠巴贝虫病的制剂中的应用，上述的一种分离的基因可编码田鼠巴贝虫2D97抗原蛋白，其序列如SEQ ID NO：1所示。所述的制剂包括用于治疗、预防的药物，用于检测、诊断的试剂条、试剂盒等。