[发明专利]一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法

说明书

本发明公开了一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法，包括如下步骤：采用乙醇溶液对番石榴叶粉末进行浸提，用微孔滤膜滤去残渣后收集提取液；得到的提取液采用超高效液相色谱法进行分离，得到不同馏分；采用飞行时间质谱法采集数据，结合目标化合物的一级质谱、二级质谱、同位素分布和化合物裂解规律进行化学成分的鉴定。本发明的鉴定方法，采用有机溶剂沉淀法浸提提取番石榴叶中化学成分，处理简单，操作简便，无需繁琐的提取步骤；采用超高效液相色谱法对番石榴叶的化学成分进行分离，极大提高了化学成分的纯度和鉴定的效率，检测时间短，检测限、精密度和回收率方面的效果优良；采用质谱法采集数据，灵敏度高，准确性强。

技术领域

本发明属于番石榴叶加工领域，尤其涉及一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法。

背景技术

番石榴叶为桃金娘科番石榴属植物番石榴的干燥叶，其中化学成分以多酚类、黄酮和三萜类物质为主，药理研究表明具有降血糖、降血脂、抗病毒、抑菌等活性作用。这些化学活性成分具有抗氧化、预防或抑制肿瘤、抗菌、抗动脉粥样硬化、降血脂、预防或治疗冠心病和中风等心脑血管疾病的生理功效。因此，借助各种技术手段从番石榴叶中提取和鉴定生物活性物质已成为目前的研究热点。

目前，植物多酚、黄酮和三萜类物质的测定方法主要有分光光度法(UV)、高效液相色谱(HPLC)、液质联用(LC-MS)、高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)。但是这些方法不能快速准确地测定所有的对象，都具有一定的局限性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种快速测定番石榴叶中所有化学成分的鉴定方法。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为提供一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法，包括如下步骤：

(1)采用乙醇溶液对番石榴叶粉末进行浸提，用微孔滤膜滤去残渣后收集提取液；

(2)将所述步骤(1)后得到的提取液采用超高效液相色谱法进行分离，得到不同馏分；

(3)将所述步骤(2)后得到的不同馏分采用飞行时间质谱法采集数据，结合目标化合物的一级质谱、二级质谱、同位素分布和化合物裂解规律进行化学成分的鉴定。

超高效液相色谱与飞行时间质谱联用(UPLC/Q-TOF-MS/MS)技术作为一种新型的分析技术可以提供良好的分离效果，具有高分辨、高灵敏的定性能力和强大的结构表征能力。本专利采用UPLC/Q-TOF-MS/MS技术，鉴定了番石榴叶的化学成分及阐释其药效物质研究提供依据。与传统的测定方法相比较，这种技术具有无溶剂残留、不会分解和破坏番石榴叶中天然活性成分以及热不稳定成分等优点，还能快捷、准确、较全面地鉴定番石榴叶中的化学成分。相较于其他分离方法，准确度超高，分离范围广，它对番石榴叶中化合物的结构破坏性小。具有其他方法无可比拟的灵敏度，对于未知化合物的结构分析定性十分准确，对相应的标准样品要求也比较低。

上述的鉴定方法，优选的，所述步骤(1)中，乙醇溶液与番石榴叶粉末的液固比为(10～50)mL∶1g，浸提温度为55-95℃，浸提时间为1.0-3.0h，乙醇溶液的体积浓度为50-90％，微孔滤膜的过滤孔径为0.20-0.24mm。乙醇作溶剂浸提番石榴叶化学成分时分离得到的峰数较多，而且相比甲醇，有更好地溶解性和挥发性等分离性质，有利于它的去除和后续的物质鉴定。

优选的，所述步骤(1)中，乙醇溶液与番石榴叶粉末的液固比为10～30mL∶1g，浸提温度为60～90℃，浸提时间为1.0～3.0h，乙醇溶液的体积浓度为60～90％，微孔滤膜的过滤孔径为0.22mm。

优选的，所述步骤(2)中，采用超高效液相色谱法进行分离的具体操作包括如下步骤：采用安捷伦SB-C8色谱柱，以体积浓度为0.1％的甲酸水溶液和甲酸甲醇为流动相进行梯度洗脱，体积流量为0.2～0.4mL/min，进样体积为4～6μL。