[发明专利]一种可同时识别NDM-1和VIM-2的核酸适体

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种可同时识别NDM‑1(New Delhi metallo‑beta‑lactamase 1)和VIM‑2(Verona integron‑encoded metallo‑beta‑lactamase 2)的核酸适体APNV，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。NDM‑1和VIM‑2是常见的两种金属‑β‑内酰胺酶，底物谱较广泛，可以水解除氨曲南外的几乎所有β‑内酰胺类抗生素，且不能被临床上的β‑内酰胺酶抑制剂，如克拉维酸等抑制。本发明采用SELEX技术筛选获得了一种可高亲和力同时结合NDM‑1和VIM‑2的核酸适体APNV，结合的亲和力相比单克隆抗体更高，能够同时检测NDM‑1和/或VIM‑2耐药细菌，检测时间短，特异性强，稳定性好，成本低廉，易于保存和运输，无需复杂的实验条件，检测方法简单易行，能够应用于临床快速诊断，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及利用分子生物学技术筛选到一种可同时识别NDM-1(New Delhi metallo-beta-lactamase 1)和VIM-2(Verona integron-encodedmetallo-beta-lactamase 2)的核酸适体及其筛选方法和应用。

背景技术

1983年报道了第一例携带质粒编码的能水解三代头孢菌素的超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯杆菌，之后耐药菌的发现报道便屡见不鲜。碳青霉稀类抗生素由于对超广谱β-内酰胺酶的水解作用稳定，一直被用于治疗产超广谱β-内酰胺酶的耐药菌感染。临床常用的碳青霉烯类抗生素主要有美罗培南，亚胺培南等,随着应用越来越广,国内外己出现大量对此类药物耐药的肠杆菌科细菌,及多重耐药菌株，这类细菌被称为“超级细菌”。近年来，“超级细菌”掀起了继甲型H1N1流感之后全球的又一新“浪潮”，引起人们的恐慌。“超级细菌”能产生一种特殊的β-内酰胺酶，由于活性中心为金属离子，属于β-内酰胺酶的B型酶，又称为金属β-内酰胺酶(Metallo-beta-lactamases，MBLs)，携带有新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-beta-lactamase 1，NDM-1)耐药基因的超级肺炎克雷伯杆菌便是“超级细菌”中的一种，于2009年首次在印度新德里被发现，其不仅可以水解除氨曲南外几乎所有β-内酰胺类抗生素,NDM-1编码基因还常与其他耐药基因共存共转移扩大底物谱。

除了NDM-1外，目前已发现的金属β-内酰胺酶还有VIM-2(Verona integron-encoded metallo-beta-lactamase 2)，于2000年法国科学家首次报道了从1株绿脓假单胞菌中检出了金属酶基因bla_VIM-2，后因2009年报道的NDM-1与VIM-2序列相似度极高而再次被广泛关注，VIM-2的氨基酸序列与NDM-1有约32％的氨基酸序列相似，两者基因可通过质粒或整合子机制在不同种细菌间进行水平传播，给临床治疗带来严重的威胁，至今还未发现临床有效的抑制剂。因此，加强对携带NDM-1和VIM-2基因的细菌进行检测对于临床治疗而言极为重要。