[发明专利]一种可同时识别NDM-1和VIM-2的核酸适体

权利要求书

1.一种可同时识别NDM-1和VIM-2的核酸适体APNV，其特征在于：所述核酸适体的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的核酸适体APNV的筛选方法，其特征在于：利用SELEX(Systematic Evolution ofLigands by Exponential Enrichment)技术从DNA文库中筛选，还包括NDM-1核酸适体和VIM-2核酸适体交替筛选步骤；

所述NDM-1核酸适体和VIM-2核酸适体交替筛选步骤如下：

(1)随机单链DNA文库的预处理：将所述DNA文库于95℃加热变性10min后立即置于冰中15min以上，用筛选缓冲液稀释至所需体积；

(2)DNA文库与酶结合：将吸附有NDM-1或VIM-2的硝酸纤维素膜浸泡于将经过预处理后的随机单链DNA文库中，并于37℃缓慢颠倒混合温育45min，取出滤膜再用洗涤缓冲液连续洗涤10次，去除未与靶分子结合及结合不牢固的单链DNA；

(3)单链DNA的制备：取步骤(2)处理后的滤膜，用灭菌后的剪刀剪碎后，加入超纯水200μl，100℃水浴处理10min，12000g离心2min，取上清作为PCR模版，用第一引物和生物素标记的第二引物进行PCR扩增，扩增产物用PCR产物纯化试剂盒进行回收，然后加入到链亲和素磁纳米磁颗粒中，室温下温育30min后，在磁力架上静置5min，去掉上清，向链亲和素纳米磁颗粒中加入200mol/L的氢氧化钠溶液，使目的单链DNA脱离纳米磁颗粒；然后在磁力架上静置后，取上清，用200mmol/L的盐酸调节pH值至6.8-7.2，所获得的单链DNA即可用于后续的筛选；所述NDM-1核酸适体及所述VIM-2核酸适体的筛选分别经过步骤(1)至(3)，交替进行8轮筛选，获得可同时识别NDM-1和VIM-2的核酸适体。

3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于：所述DNA文库是随机单链DNA文库，所述随机单链DNA文库的两端为已知的引物序列、中间为35个碱基的随机序列：5’-GCAATGGTACGGTACTTCC-(N35)-CAAAGTGCACGCTACTTCGTAA-3’，N35表示35个随机核苷酸。

4.一种单链寡核苷酸，其特征在于：含有权利要求1所述的核酸适体APNV。

5.权利要求1所述的核酸适体APNV在制备NDM-1和/或VIM-2检测试剂中的应用。