[发明专利]羌活种子组培快速繁育技术

说明书

本发明公开了一种羌活种子组培快速繁育技术，将层积处理后的羌活种子接种在基础培养基，获得50%以上的诱导发芽率；随后，将幼芽转接至增殖培养基中，使增殖系统提高至6左右，且植株无畸形、无褐化；最后，切分增殖体为单株进行生根培养即可。本发明采用羌活种子代替现有羌活根芽或幼叶作为组织培养的外植体，消除了环境温度对外植体培养的影响，并且显著提高了外植体增殖效率，从而实现羌活种苗的快速繁育。

技术领域

本发明涉及一种羌活种子组培快速繁育技术，属于羌活组织培养育苗技术领域。

背景技术

羌活为伞形科羌活多年生草本植物，以根状茎和根入药，具有性温、味苦，既能发汗解表，又可祛风湿而止痛，临床多用于感冒风寒、头痛无汗、风寒湿痹、骨节酸痛、跌打损伤等病症。主要分布在四川、青海、甘肃、西藏等省的高寒地区的高山林荫湿地，种子繁育能力低、生长缓慢、分布范围狭窄，导致野生植株数量较少。近年来，随着羌活用途的多样化，其市场价格不断攀升，导致大量的采挖，使野生羌活资源濒临灭绝。

现有羌活育苗方法主要包括种子直播和组织培养两种形式。但由于羌活种子为胚后熟休眠类型，属于双重休眠，因而在自然条件下，羌活种子需经一年才能萌发，且自然萌发率极低。人工进行种子直播时，除需对种子进行层积处理打破休眠外，还须进行严格且繁琐的苗期管理，耗费大量的人力，导致育苗成本较高，而成苗率却极不稳定。而组织培养技术能够在短时间内完成大批量植株的培育，因而成为目前羌活快速繁育及种质资源保存的重要技术手段。如中国发明专利CN1918972公开了一种羌活组织培养繁殖方法，中国发明专利申请CN2012101437810公开了一种宽叶羌活组织培养离体快速繁殖方法，中国发明专利申请CN2012101437859公开了一种羌活组织培养离体快速繁殖方法。上述现有技术方案中由于采用羌活根芽或幼叶作为外植体，其组织诱导培养时受秋冬季节低温或夏季高温影响严重，且其萌动后的培育周期长、增值系数低，从而影响羌活组织培养育苗质量和效率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种羌活种子组培快速繁育技术，将层积处理后的羌活种子接种在基础培养基，获得50%以上的诱导发芽率；随后，将幼芽转接至增殖培养基中，使增殖系统提高至6左右，且植株无畸形、无褐化；最后，切分增殖体为单株进行生根培养即可。本发明采用羌活种子代替现有羌活根芽或幼叶作为组织培养的外植体，消除了环境温度对外植体培养的影响，并且显著提高了外植体增殖效率，从而实现羌活种苗的快速繁育。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

羌活种子组培快速繁育技术，其特征在于包括以下步骤：

S1. 选取已完成层级处理的羌活种子进行无菌处理；

S2. 将步骤S1处理后的无菌羌活种子放置于MS+NAA的基础培养基上培养至种子发芽；

S3. 将步骤S2得到的幼芽去根去顶后转接至MS+KT+6-BA+NAA的增殖培养基上培养至形成丛生芽；

S4. 将步骤S3得到的丛生芽切分成单株，转接至MS+NAA的生根培养基上培养至植株生根。

进一步地，步骤S1中所述的无菌处理包括以下步骤：

S11. 将羌活种子用水浸泡至种皮膨胀后，去除羌活种子的种皮；

S12. 流水冲洗步骤S11获得的去皮羌活种子；

S13. 在超净工作台中采用酒精浸泡或擦拭步骤S12处理后的羌活种子后，采用无菌水清洗2~3次；

S14. 采用质量体积比浓度为0.1%升汞溶液浸泡步骤S13处理后的羌活种子，随后采用无菌水清洗3~5次。

进一步地，步骤S12中所述的流水冲洗时间不少于30min。