[发明专利]核酸层析快速检测转基因产品的方法

说明书

本发明公开了一种核酸层析快速检测转基因产品的方法。本发明包括转基因产品处理、核酸裂解、核酸PCR扩增和采用待测PCR扩增样品核酸层析试纸条检测的四个步骤。本发明所述的方法具有灵敏度高、检测时间短、安全性高等优点，可广泛应用于转基因产品精确快速检测，提高食品的监管力度和质量水平，监管转基因食品非法销售提供有效的方法。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体地涉及一种核酸层析快速检测转基因产品的方法。

背景技术

一般转基因检测分为核酸水平检测和蛋白水平检测。

蛋白水平检测(现有胶体金蛋白试纸技术)检测便捷，但是由于有些转基因样品蛋白未能表达，且蛋白容易降解，因此有可能待测样品内蛋白表未达或者待测样品储存条件造成降解，所以造成假阴性结果(阳性未检出)。蛋白试纸条方法具有快速、简便、经济的优点，无需任何特殊仪器设备，但由于其检测灵敏度较低、适用范围窄，主要适用于转基因植物的大田和原材料的快速初筛。

PCR方法是基于基因水平的检测，可检出存在于样品基因组内的待测基因而不受基因表达情况的影响。但是PCR方法对实验设施和条件要求较高，且比较费时。目前普通PCR检测方法是我国转基因植物检测的核心技术，但该方法对实验条件要求较高，对实验区要求具有前PCR区、样品制备区、核酸提取纯化区、PCR体系配置区、PCR反应区、电泳分析区等功能区，需要生物安全柜、高压灭菌锅、组织粉碎机、恒温水浴锅、高速冷冻离心机、核酸定量检测仪器、生物安全柜、PCR扩增仪、涡旋混合仪、电泳系统、凝胶成像系统等。

发明内容

鉴于上述问题，本发明旨在提出一种核酸层析快速检测转基因产品的方法，其仅需使用较少设备就能快速地以PCR方法进行转基因产品检测。

本发明的核酸层析快速检测转基因产品的方法，其包括以下步骤：

步骤1)样本处理：取30mg待测粉状物样本，加500μl ddH2O，使用移液枪多次吹吸混匀，静置5min得到待测样本备用；

步骤2)DNA一管法提取步骤：取5μl核酸释放剂，加入PCR反应管中；取所述待测样本5μl加入对应的PCR反应管中，并用移液器在管底吹打混匀10次；每个PCR反应管中加30μl无菌石蜡油；将PCR反应管放置在PCR仪中进行裂解，得到裂解样品；

步骤3)试样PCR反应：在PCR反应管中依次加入反应试剂、混匀，加入到所述裂解样品中；将PCR反应管放到离心机上，500g-1000g离心10s，然后取出PCR反应管，放入PCR仪中进行扩增得到反应产物；

步骤4)PCR产物胶体金检测：将PCR反应管从PCR仪中取出，取预定量的反应产物到入胶体金核酸层析试纸条上，等待5-10min后观察显色状况；如果胶体金检测T线和C线出现肉眼可见显色，则表明样品含有转基因成分。

优选地，所述步骤2)中的裂解程序为将样品置于95℃反应10min后，再置于4℃冷却5min。

优选地，所述步骤3)中的PCR反应体系总体积为35μl，其中：ddH2O为27.4μl，10×PCR Buffer为5μl，du dNTP混合液为1μl；10μmol/L上游引物为0.3μl，10μmol/L下游引物为0.3μl，Taq DNA聚合酶为1μl；

其中10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、3～5％体积的BSA、1％～2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。

优选地，所述上游引物序列为地高辛标记；所述下游引物序列为生物素标记。

优选地，所述步骤3)中的PCR扩增程序如下：50℃反应2分钟后升温到95℃反应5分钟，然后进入32次循环，每次循环中在95℃反应15sec，然后在60℃反应45sec。