[发明专利]一种蛋白的非还原肽图分析方法有效
| 申请号： | 201810632993.2 | 申请日： | 2018-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN110618229B | 公开（公告）日： | 2022-10-28 |
| 发明（设计）人： | 柯潇;唐懿挺;罗祖秀 | 申请（专利权）人： | 成都康弘生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/89 | 分类号： | G01N30/89 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610036 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白 还原 分析 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种蛋白的非还原肽图分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）样品处理：将蛋白加入变性试剂进行变性后，加入胰蛋白酶进行酶解，然后酸终止酶解反应；
2）反相高效液相色谱检测：对终止酶解后的样品进行反相高效液相色谱检测，检测条件为：
色谱柱：反相十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流动相A：0.1%三氟乙酸的水溶液；
流动相B：0.07-0.1%三氟乙酸的含水乙腈溶液，其中水的含量为10-30%；
柱温：30-60℃；
检测波长：214nm；
梯度洗脱；
所述的蛋白为序列1；
所述梯度洗脱程序为：
时间/min 流动相A 流动相B 0.00 100 0 5.00 100 0 95.00 55 45 95.01 0 100 105.00 0 100 105.01 100 0 120.00 100 0
所述变性试剂为RapiGest SF；所述RapiGest SF浓度为0.1-0.2w/v%。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述胰蛋白酶为甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮处理的胰蛋白酶、测序级胰蛋白酶或质谱级胰蛋白酶；胰蛋白酶浓度相对于蛋白质量比为25:1~50:1。
3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述RapiGest SF浓度为0.2w/v%。
4.根据权利要求2所述的分析方法，其特征在于所述胰蛋白酶为测序级胰酶。
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