[发明专利]基于AuNPs增强Na2

权利要求书

1.基于AuNPs增强Na₂S₂O₈/O₂的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

以AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极为工作电极而构建三电极系统，将三电极系统置于Na₂S₂O₈/O₂溶液中，检测AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极的ECL信号，并根据加入的蛋白激酶浓度的对数与Na₂S₂O₈/O₂体系的ECL信号的强度之间的线性关系来实现对蛋白激酶活性的高灵敏检测；或根据加入的蛋白激酶抑制剂浓度与Na₂S₂O₈/O₂的ECL信号的强度之间的线性关系来计算出蛋白激酶抑制剂的半抑制浓度，用于评价抑制剂对蛋白激酶活性的抑制效果；

其中，所述AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极的制备方法包括如下步骤：

将7 μL壳聚糖溶液滴涂到清洗干净的玻碳电极表面，晾干后，将电极浸入含5 mM N-乙基-N’-1-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、8 mM N-羟基琥珀酰亚胺和120 μM多肽的HEPES缓冲溶液中反应过夜，用超纯水清洗电极表面后，将电极浸入含有100 µM巯基三磷酸腺苷和不同浓度蛋白激酶的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液中，在37 ºC水浴中反应100min，用超纯水清洗电极表面后，将电极置于AuNPs溶液中孵育1 h，制成AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极。

2.如权利要求1所述的基于AuNPs增强Na₂S₂O₈/O₂的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，所述三电极系统是以AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰玻碳电极作为工作电极、铂丝为对电极和Ag/AgCl电极作为参比电极而构建的三电极系统。

3.如权利要求1所述的基于AuNPs增强Na₂S₂O₈/O₂的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，所述检测AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极的ECL信号是通过MPI-B型多参数化学分析测试系统测试光电倍增管高压为800 V时AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰玻碳电极在-1.8~0V电位范围的ECL信号。

4.如权利要求1所述的基于AuNPs增强Na₂S₂O₈/O₂的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，所述的Na₂S₂O₈/O₂溶液为含有0.1 M Na₂S₂O₈和0.1 M KCl的0.1 M pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液。

5.如权利要求1所述基于AuNPs增强Na₂S₂O₈/O₂的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，所述的壳聚糖溶液的质量百分浓度为0.2%，配制方法为将壳聚糖加入到质量百分浓度为1%的醋酸溶液中超声溶解。

6.如权利要求1所述基于AuNPs增强Na₂S₂O₈/O₂的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，所述的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液的浓度为20 mM，pH为7.4，含20 mM的MgCl₂。