[发明专利]一种抗EV-D68病毒的单克隆抗体及其制备和应用

说明书

本发明公开了一种抗EV‑D68病毒的单克隆抗体及其制备和应用。首次运用单个B细胞分离技术对EV‑D68病毒感染的恒河猴进行特异性单个记忆B细胞的分选，获得了配对的抗体轻重链基因，并进一步筛选得到具有中和活性的EV‑D68特异性单克隆抗体。该单克隆抗体包括重链和轻链，其核苷酸编码序列和氨基酸编码序列如序列表所示。本发明为针对EV‑D68感染的预防和治疗提供了备选药物，也为鉴定EV‑D68病毒提供了一种新的工具和思路。

技术领域

本发明属于抗感染性单克隆抗体制备技术领域，具体是涉及一种能有效抑制EV-D68病毒感染的单克隆抗体。同时，本发明还涉及所述单克隆抗体的制备方法，以及该抗体在EV-D68病毒鉴定、制备抗感染药物等方面的应用。

背景技术

EV-D68(Enterovirus D68，EV-D68)病毒属于小核糖核酸病毒科，肠道病毒属。1962年，首次在美国分离获得。2014年，美国和加拿大地区出现EV-D68大规模爆发及广泛流行。随后在欧洲、泰国、中国、新西兰等地区也出现了由EV-D68病毒引起的呼吸道疾病的流行。EV-D68病毒不仅可以引起严重的呼吸道疾病，比如肺炎；还可以引起中枢神经系统症状，比如急性迟缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis，AFP)。鉴于有效治疗药物及预防性疫苗依然处于探索阶段，基于感染的动物模型开展单克隆抗体分选和鉴定的研究有望为EV-D68病毒的预防和治疗提供新的突破口。

近年来，单克隆抗体技术不断发展。抗感染性单克隆抗体具有以下优势：快速和立即的保护作用、针对病原体的特异性、相对较低的临床副作用。另外，单抗识别的抗原表位可作为新型基因工程疫苗设计的靶点。凭借这些优点，抗感染性单克隆抗体已经成为许多疾病的理想治疗性试剂，广泛应用于癌症、自身免疫紊乱及感染性疾病中，已成为预防性疫苗的重要补充。最早单克隆抗体是基于B细胞融合的杂交瘤技术所获得的鼠源单克隆抗体。这种技术虽然可以获得针对大部分抗原的单克隆抗体，但是这种单克隆抗体易引起人体自身对异源蛋白的免疫反应。为减少这种限制，研究者对鼠源单克隆抗体进行人源化改造，但这种人源化抗体仍不能模拟人体内天然抗体的精确构象及针对靶抗原的特异性。为彻底解决这种鼠源系统的干扰，有科学家开始使用全人源化的杂交瘤技术。随之而来的其他单抗展示技术也不断涌现，包括噬菌体展示技术、酵母展示技术、哺乳动物细胞展示技术等。但这些技术仍旧存在缺点：产生的抗体轻重链基因配对为非自然随机配对，产生的抗体与天然抗体活性有差别。鉴于上述缺点，一种基于直接扩增人体单个B细胞内所编码的抗体轻重链基因的单克隆抗体分离策略应运而生，这种单个B细胞分离技术能够更有效地分离得到功能性的、天然存在体内的单克隆抗体。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种抗EV-D68病毒的单克隆抗体，为针对EV-D68病毒感染的预防和治疗提供候选药物。

本发明的另一个目的在于提供一种制备所述单克隆抗体的方法。

本发明的目的还在于提供所述单克隆抗体在制备治疗或预防EV-D68病毒感染药物方面的应用。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

一种抗EV-D68病毒的单克隆抗体，包括重链和轻链，其特征在于：所述的单克隆抗体重链可变区的CDR2-FR3-CDR3-FR4核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO.1所示；轻链可变区的CDR2-FR3-CDR3-FR4核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO.2所示；所述的单克隆抗体重链可变区CDR2-FR3-CDR3-FR4氨基酸编码序列如序列表SEQ ID NO.3所示；轻链可变区CDR2-FR3-CDR3-FR4氨基酸编码序列如序列表SEQ ID NO.4所示。

一种制备所述抗EV-D68病毒的单克隆抗体的方法，包括以下步骤：

(1)用EV-D68病毒滴鼻感染恒河猴，作为EV-D68特异性单个B细胞的分选供体；