[发明专利]一种丝胶蛋白可视化检测方法

说明书

本发明公开了一种丝胶蛋白可视化检测方法，该方法首先筛选丝胶蛋白亲和多肽，然后筛选丝胶蛋白最佳结合多肽，再制备丝胶蛋白亲和多肽可视化探针，最后用制备的丝胶蛋白亲和多肽可视化探针进行检测，包括检测待测物是否为丝胶蛋白以及检测丝胶蛋白薄膜的纹理。本发明的检测探针制备简单，原理清晰，合成方便。通过该发明制得的检测探针具有特异性，可以很好的对丝胶蛋白进行识别。

技术领域

本发明属于丝胶蛋白的检测技术领域，尤其涉及一种丝胶蛋白可视化检测方法。

背景技术

丝绸是天然存在的聚合物，已被临床用作缝合线达数百年之久。丝蛋白由丝素蛋白和丝 胶蛋白组成。长久以来，丝胶蛋白一直被作为丝绸加工中的废弃物而丢弃，鲜有人对其应用 进行研究。近年来，随着研究的不断深入，丝胶蛋白在生物医学方面的应用逐渐被发现。研 究表明，丝胶蛋白具有抗氧化能力，保湿性等多重特性，并且对提高细胞生物活性有一定的 促进作用，可以作为各种生物医用材料。

丝胶蛋白作为一种优良的改性材料，可以对纺织品的品质进行优化，经过丝胶蛋白处理 过后的织物品质均有明显提高。此外，丝胶蛋白在食品添加剂以及化妆品中也有所应用。能 够准确地检测这些产品中的丝胶蛋白含量对于产品质量检验有着重要的意义。

现在对于丝胶蛋白的检测技术难以胜任特异性检测以及超灵敏检测的需求。例如丝胶废 水回收实验中的丝胶蛋白浓度检测通常采用凯氏定氮法，但该方法并非特异性检测方法，结 果很容易受到废水中其他含氮有机物的影响。实验室中常采用蒸发水分法来计算丝胶蛋白的 浓度，这种方法虽然操作简单，但对于低浓度的丝胶蛋白溶液检测能力有限且检测结果容易 受到水中其它杂质的影响。

发明内容

本发明正是针对现有技术中存在的不足之处所作出的改进，提供了一种丝胶蛋白可视化 检测方法。

为了实现上述目的，本发明的具体技术方案如下：一种丝胶蛋白可视化检测方法，包括 以下步骤：

1、丝胶蛋白亲和多肽的筛选，具体为：

1.1噬菌体消减筛选：将M13噬菌体展示文库用移液器移10μL至24孔板并加入300μL的PBST 溶液，然后将其在摇床上以140rpm的速度摇1h；所述PBST溶液由质量含量为99.5％的PBS (phosphate buffer saline，磷酸缓冲盐溶液)和质量含量为0.5％的吐温20组成。

1.2、制备丝胶蛋白薄膜：取300μL浓度为20mg/mL的丝胶蛋白水溶液，滴于24孔板中并室温 静置干燥，得丝胶蛋白薄膜，待完全干燥后在丝胶蛋白薄膜上加入300μL的体积含量为90％的 乙醇的水溶液，静置十分钟再在孔中加入60μL去离子水，静置30分钟。

1.3、封闭丝胶蛋白薄膜：除去丝胶蛋白薄膜上的乙醇；并加入400μL的PBST溶液孵育6分钟， 除去PBST溶液，从而对丝胶蛋白薄膜上的乙醇进行清洗，重复清洗3次，以充分清洗丝胶蛋 白薄膜上的酒精；然后加入400μL封闭液对丝胶蛋白薄膜进行封闭处理，封闭处理需在4℃静 置1小时；所述封闭液由质量含量为99.5％的PBS和质量含量为0.5％的BSA(albumin from bovine serum，牛血清白蛋白)组成。

1.4、丝胶蛋白薄膜和噬菌体的结合：取出步骤1.3封闭好的24孔板，加入400μL的PBST溶液孵 育6分钟，除去PBST溶液，从而对丝胶蛋白薄膜上的封闭液进行清洗，重复清洗10次；清洗 完成后在丝胶蛋白膜上加入步骤1.1处理后的噬菌体并室温孵育1小时。