[发明专利]超顺磁性纳米磁珠革兰氏染色试剂盒

权利要求书

1.一种超顺磁性纳米磁珠，其特征在于，所述纳米磁珠为表面改性的纳米四氧化三铁磁珠，其中，所述超顺磁性纳米磁珠的粒径为10～100nm，所述超顺磁性纳米磁珠的比饱和磁化强度为70～80emu/g。

2.一种如权利要求1所述的超顺纳米磁珠的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1，制备纳米级的裸磁珠；

步骤2，对纳米裸磁珠进行改性，制备得到超顺磁性纳米磁珠。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超顺磁性纳米磁珠的吸附主体为四氧化三铁，其制备方法包括以下步骤：

步骤1-1，将含Fe²⁺的铁盐和Fe³⁺的铁盐混合，然后加入氨水，充分反应，生成四氧化三铁；

步骤1-2，水浴搅拌步骤1-1中的反应液，使四氧化三铁熟化；

步骤1-3，在外磁场条件下对熟化的四氧化三铁进行洗涤，然后烘干，制得纳米四氧化三铁裸磁珠。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤1-1中，所述Fe³⁺与Fe²⁺的浓度比为(1.2～1.8)：1，优选为(1.4～1.5)：1；和/或

所述加入的氨水的摩尔浓度为0.25～0.75mol/L，优选为0.40～0.60mol/L，更优选为0.5mol/L。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述改性为采用分散剂来改善纳米裸磁珠的分散性，采用修饰剂来改善纳米裸磁珠的吸附能力；

优选地，所述改性包括以下子步骤：

步骤2-1，制备纳米裸磁珠的悬浮液，然后向其中滴加分散剂，进行分散；

步骤2-2，向上述分散好的混合液中，加入修饰剂，混合一定时间；

步骤2-3，将上述混合后的溶液置于外磁场中，进行洗涤。然后烘干，制得超顺磁性纳米磁珠。

6.一种革兰氏染色试剂盒，包括权利要求2至6之一所述方法制备的超顺磁性纳米磁珠，其特征在于，所述试剂盒包括超顺磁性纳米磁珠悬浮液、染液、脱色液和显色液。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述超顺磁性纳米磁珠悬浮液、染液、脱色液和显色液的体积比为250：(200～350)：(80～120)：(300～500)，优选为250：(220～320)：(90～110)：(350～450)，更优选为250：(250～300)：(95～105)：(390～420)。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述染液包括结晶紫染液、碘液和沙黄染液，三者的体积比为(1～2):1:1。

9.一种革兰氏染色方法，优选采用权利要求7或8所述的试剂盒进行，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤I，量取超顺磁性纳米磁珠悬浮液，加入待测菌液，对细菌进行固定；

步骤II，对固定的细菌进行初染和媒染；

步骤III，对初染和媒染后的细菌进行脱色处理；

步骤IV，对脱色后的细菌进行复染；

步骤V，对复染后的细菌进行显色处理，然后判断结果。

10.根据权利要求9所述的染色方法，其特征在于，步骤V中，当检测的菌液中确定有细菌时，在脱色处理后，不经过复染步骤，直接进行显色处理，然后根据上清液颜色判断结果。