[发明专利]微粒计数的方法

说明书

本发明提供了一种微粒计数的方法，涉及生物微粒检测技术领域，本发明提供的微粒计数的方法，采用基于库尔特原理的微流控芯片检测技术，分析细胞和/或微生物样品流过微流控芯片上检测区域时产生的电脉冲信号，得到微粒的粒径和数量。采用微流控芯片主要是通过芯片结构设计(降低微流道深度)减少微粒样品的分层悬浮问题，并结合光学系统的景深有效减小了图像采集时由于微粒分层造成的计数误差和细胞死活判别的误差。光学镜头景深大于芯片深度，避免了分层悬浮造成的图像特征差异。此外，芯片设计也使得加入的定量样品能全部流经检测区域，从而实现全样品计数。综上，使得细胞或其他生物微粒的计数的结果准确性和一致性大大优于现有的检测方法。

技术领域

本发明涉及生物微粒检测技术领域，尤其是涉及一种微粒计数的方法。

背景技术

在大量的细胞生物研究实验中，需要对细胞或其他生物微粒进行浓度检测(定量计数)，细胞悬液浓度(或数量)既是细胞培养的监测参数，也是很多实验项目中的必要参数，对于成功完成实验是非常基础但却很重要的过程条件。现有的计数手段主要包括采用细胞计数板的人工计数方法，基于图像分析技术的自动化计数仪器，以及利用电阻法(库尔特原理)的自动化计数仪器。

其中，人工计数方法最为普遍，实验人员将悬浮细胞样品注入细胞计数板计数池，在显微镜下以肉眼观察并按规则进行人工计数。此方法的主要缺点是：(1)由于计数池本身的深度数十倍于细胞尺度，这样就会造成细胞样品注入后在其中分层悬浮，从而观察到的细胞形态会有所差别，造成计数结果的不准确和细胞活性判断错误；(2)按规则注入细胞计数板的样品为10μL，但是在显微镜观察区域内的样品量仅仅是一小部分，不足1μL，这样细胞样品在计数池内分布是否均匀就会对结果造成很大的影响；(3)计数时是按照一定规则来人工计数的，操作人员水平的差异以及肉眼观察导致的疲劳度就引入很大的人为误差。

基于图像分析技术的自动化仪器虽避免了肉眼观察的困难，但是仍然存在以下不足：(1)引入了一次性计数片耗材的使用，增加了用户检测成本；(2)计数片在结构上与细胞计数板类似，所以也存在计数板上细胞分层悬浮导致结果不准确和活性误判的问题；(3)同人工计数一样，大部分基于图像法的仪器存在检测样品量少导致的结果偏差大的问题。

传统的库尔特计数仪器整体的集成度都不高，比如要单独配电脑，操作起来不够简捷。另外就是传统库尔特计数仪不具备细胞样品活率评判的功能。

因此，提供一种误差小、准确度高且检测成本低的微粒技术方法尤为重要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种微粒计数的方法，以缓解现有技术中存在的检测样品量少和细胞或其他生物微粒分层悬浮导致的结果不准确的技术问题。

本发明提供了一种微粒计数的方法，所述方法包括：

利用微流控芯片技术使微粒样品在检测区域通过，检测得到所述微粒的粒径和数量；

所述检测区域利用库尔特原理，用于采集所述微粒通过时产生的电脉冲信号；

所述微粒包括细胞和/或微生物。

进一步地，所述方法还包括：

利用微流控芯片技术使微粒样品在图像采集区域通过，检测得到所述微粒的活率；

所述图像采集区域用于连续采集所述微粒通过时的图像，所述微粒为细胞；

优选地，利用微流控芯片技术使微粒样品在图像采集区域通过，检测得到所述微粒的活率，之后再利用微流控芯片技术使微粒样品在检测区域通过，检测得到所述微粒的粒径和数量。

进一步地，应用微粒计数仪对微粒进行计数，所述微粒计数仪包括设有检测区域的微流控芯片。