[发明专利]一种微生物发酵将大黄素转化为大黄酸的制备工艺

说明书

本发明涉及一种微生物发酵将大黄素转化为大黄酸的制备工艺，具体包括如下步骤：(1)将耐大黄素菌株Penicillium sp.R‑01接入配制好的种子培养基中，于26～28℃下，培养3天得种子培养液；(2)取适量的步骤(1)中得到的种子培养液接入发酵培养基中，于26～28℃静置培养14‑20天，得发酵物；(3)将步骤(2)得到的发酵物过滤，收集滤液，调pH至3‑5，过滤收集沉淀并将沉淀置于饱和碳酸氢钠溶液中，搅拌5‑10min后，过滤收集滤液，调pH至3‑5后过滤，沉淀经水洗、无水乙醇洗，真空干燥后即得大黄酸。

技术领域

本发明属于微生物发酵领域，具体涉及一种微生物发酵将大黄素转化为大黄酸的制备工艺。

背景技术

大黄酸是中药芦荟、大黄等的主要有效成分，属单蒽核类1,8-二羟基蒽醌衍生物，含有2个羟基和1个羧基，具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、降糖调脂、保肝抗纤维化等多方面具有活性。本发明提供一种利用微生物发酵技术将大黄素转化为大黄酸的制备工艺。

发明内容

本发明提供一种大黄酸的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将耐大黄素菌株Penicillium sp.R-01接入配制好的种子培养基中，于26～28℃下，培养3天得种子培养液；

(2)取适量的步骤(1)中得到的种子培养液接入发酵培养基中，于26～28℃静置培养14-20天，得发酵物；

(3)将步骤(2)得到的发酵物过滤，收集滤液，调pH至3-5，过滤收集沉淀并将沉淀置于饱和碳酸氢钠溶液中，搅拌5-10min后，过滤收集滤液，调pH至3-5后过滤，沉淀经水洗、无水乙醇洗，真空干燥后即得大黄酸。

步骤(1)中，耐大黄素菌株Penicillium sp.R-01为在大黄素浓度为4mg/mL时仍可稳定生长并传代的菌株；该菌株是以大黄素为诱导药物，以保藏编号：CGMCC No.12762的海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1-6为诱导对象，制备得到的；每升种子培养基的配方如下：葡萄糖20g/L、酵母膏2g/L、蛋白胨2g/L、粗海盐2.5g/L、碳酸钠5g/L，余量为水；

步骤(2)中每升发酵培养基的配方如下：葡萄糖20g/L、酵母膏2g/L、蛋白胨2g/L、粗海盐2.5g/L、碳酸钠5g/L、大黄素1-2g，余量为水。

本发明的另一实施方案提供上述耐大黄素菌株Penicillium sp.R-01的制备方法，以保藏编号：CGMCC No.12762的海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1-6为诱导对象，以大黄素为诱导药物，以小剂量浓度递增法制备；其特征在于包括如下步骤：

在培养基中加入1.0μg/mL的大黄素，接种保藏编号：CGMCC No.12762的菌株，挑选可正常生长并稳定传代的菌株，然后将该菌株接种在含大黄素浓度为10μg/mL的培养基中，挑选可正常生长并稳定传代的菌株，然后将该菌株接种在含大黄素浓度为20μg/mL的培养基中，挑选可正常生长并稳定传代的菌株，重复上述操作，所用培养基中的大黄素浓度依次增加至50、100、200、500、1000、2000、3000、4000μg/mL，直至筛选出可以在4mg/mL浓度下，可正常生长并稳定传代的菌株，即为耐大黄素菌株Penicillium sp.R-01。

本发明的另一实施方案提供上述耐大黄素菌株Penicillium sp.R-01在制备大黄酸中的应用。

与现有技术相比，本发明的优点在于：通过使用大黄素对真菌CGMCC No.12762进行诱导，得到耐大黄素菌株Penicillium sp.R-01，该菌株可以将大黄素转化为大黄酸，转化操作简便且转化率高。

具体实施方式