[发明专利]一种人工密码子优化的伪狂犬病毒类gE蛋白及其用途

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人工密码子优化的伪狂犬病毒类gE蛋白及其编码基因及其用途，本发明通过人工密码子优化与合成可被伪狂犬病毒gE抗体识别的类gE蛋白基因，利用人工合成核苷酸序列构建表达载体，并经过western blotting、ELISA、测序分析伪狂犬病毒类gE蛋白与伪狂犬病毒gE抗体的特异性识别能力。本发明获得的伪狂犬病毒类gE蛋白能用于制备猪感染伪狂犬病毒野生株的鉴别诊断试剂盒。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及伪狂犬病毒类gE蛋白，具体涉及一种人工密码子优化的伪狂犬病毒类gE蛋白及其编码基因及其用途。获得的伪狂犬病毒类gE蛋白可用于制备猪感染伪狂犬病毒野生株的鉴别诊断试剂盒。

背景技术

伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是世界动物卫生组织(OIE)通报的传染病，也是“国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)”中被列为优先防治的猪病之一，该疾患是由伪狂犬病病毒(Pseudo rabievims,PRV)引起的多种家畜和野生动物如猪、牛、羊、犬、家兔小鼠、水貂、狐等发病的一种急性传染病。实践中猪感染PRV后临床表现多样，新生仔猪呈现神经系统紊乱和死亡，成年猪表现呼吸困难、母猪繁殖障碍为特征，给养猪业造成严重的经济损失。近年来随着PRV缺失疫苗的广泛应用，该疾患的防控取得了显著效果，但随着猪场混合感染的发生，导致伪狂犬病的发病逐年上升。因此，建立快速有效的诊断检测方法对控制和根除伪狂犬病具有重要意义。

研究公开了伪狂犬gE蛋白是一种囊膜糖蛋白，其功能是促进细胞融合，介导PRV在神经细胞内的传导，一旦缺失gE基因，PRV不能有效的在神经细胞之间运输，严重影响PRV对神经系统的侵害；但是，缺失gE基因并不影响PRV侵入宿主细胞，也不影响PRV在宿主细胞内的复制，因此，gE基因的缺失是PRV疫苗的必须缺失基因，在鉴别诊断中具有重要的意义。

由于猪伪狂犬病gE基因缺失疫苗的使用，可通过检测猪血清中gE抗体的存在，鉴别诊断是否猪感染PRV野毒株。目前，已有研究利用大肠杆菌或酵母等表达系统的表达产物制备猪伪狂犬病毒gE蛋白并建立了相应的血清中gE抗体的ELISA鉴别诊断方法，但由于gE基因中有大量GC核苷酸碱基的存在，其所占比例高达74％，所以大肠杆菌或酵母表达系统中难以表达或产量低，因而，目前PRV的gE制备，多采用将gE基因进行截断而制备gE蛋白的多肽片段，从而提高gE在大肠杆菌或酵母表达系统中表达产量。因此，能够制备被抗完整伪狂犬病毒gE蛋白抗体所识别的抗原，将有利于提高血清抗体的检测率及特异性，更适用于鉴别诊断。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种人工密码子优化的伪狂犬病毒类gE蛋白及其编码基因及其用途，获得的伪狂犬病毒类gE蛋白可用于制备猪感染伪狂犬病毒野生株的鉴别诊断试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于基于现有技术的现状，提供一种人工密码子优化的可被抗伪狂犬病毒gE抗体所识别的类gE蛋白及其编码基因，及其用途。

本发明通过人工密码子优化与合成可被伪狂犬病毒gE抗体识别的类gE蛋白基因，利用人工合成核苷酸序列构建表达载体，经过western blotting、ELISA、测序分析伪狂犬病毒类gE蛋白与伪狂犬病毒gE抗体的特异性识别能力，获得伪狂犬病毒类gE蛋白；本发明获得的伪狂犬病毒类gE蛋白能用于制备猪感染伪狂犬病毒野生株的鉴别诊断试剂盒。

具体的，

本发明提供了一种人工密码子优化的可被抗伪狂犬病毒gE抗体所识别的类gE蛋白及其编码基因，然而产生本发明的基因序列的方法不受特别的限制。

编码所述的可被抗伪狂犬病毒gE抗体所识别的类gE蛋白编码核苷酸序列为SEQ1，其氨基酸序列为SEQ2。

含有编码本发明的可被抗伪狂犬病毒gE抗体所识别的类gE蛋白及其编码基因的质粒载体构成了本发明的一个部分。