[发明专利]一种靶向MUC1的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向MUC1的单链抗体，所述靶向MUC1的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本发明还提供了一种包括所述靶向MUC1的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞，所述靶向MUC1的嵌合抗原受体可以专一性的靶向MUC1，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，更好的维持细胞的活力和杀伤力。本发明还提供了一种靶向MUC1的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向MUC1的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

粘蛋白(mucin，MUC)是一种高分子量的糖蛋白，其中MUC1是广泛研究的粘蛋白家族成员之一。研究发现，MUC1在多种肿瘤的表达水平增加，增加程度与肿瘤的恶性程度成正比，而且丧失极性分布，并出现糖基化不完全的情况，从而使得MUC1多肽骨架上的抗原决定簇暴露出来，成为免疫治疗的靶点。同时，MUC1既能被多种MUC1抗体识别，也可被细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别和杀伤，且不受MHC限制。因此，MUC1是较为理想的抗肿瘤靶点，成为一种新的肿瘤标记物。

免疫细胞治疗是现有科技中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，其中嵌合抗原受体T细胞技术(CAR-T)为当前过继性细胞回输治疗技术最新的免疫细胞技术之一，因其能够在体内能激活自身免疫系统，持续性地靶向肿瘤细胞进行杀伤，最终达到清除恶性肿瘤细胞的目的而受到广泛的关注和研究。因此，结合CAR-T手段，靶向和结合MUC1靶点，作为新的肿瘤治疗药物，对肿瘤的治愈有重大意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种靶向MUC1的单链抗体，以及包括所述靶向MUC1的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞。所述靶向MUC1的嵌合抗原受体可以专一性的靶向MUC1，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤肿瘤细胞。本发明还提供了一种靶向MUC1的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

第一方面，本发明提供了一种靶向MUC1的单链抗体，所述靶向MUC1的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

可选的，所述靶向MUC1的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可选的，所述靶向MUC1的单链抗体的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQ ID NO:2具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQ ID NO:1。

本发明第一方面提供的所述靶向MUC1的单链抗体能够与MUC1蛋白发生特异性结合，对表达MUC1的肿瘤细胞，特别是实体瘤细胞具有较强的亲和活性。

第二方面，本发明提供了一种靶向MUC1的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向MUC1的嵌合抗原受体CAR-MUC1，所述CAR-MUC1的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向MUC1的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中，所述靶向MUC1的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

其中，所述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向MUC1的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述胞外铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。

在本发明中所述胞外铰链区用于促进所述靶向MUC1的单链抗体与肿瘤上的MUC1结合。

可选的，所述胞外铰链区包括CD8α铰链区、CD28铰链区、CD4铰链区、CD5铰链区、CD134铰链区、CD137铰链区、ICOS铰链区中的一种或多种的组合。