[发明专利]一种在MDCK全悬浮细胞上增殖禽流感病毒的方法及其应用

权利要求书

1.一种在MDCK全悬浮细胞上增殖禽流感病毒的方法，其特征在于，包括：

在无血清培养基中将保藏编号为CCTCC NO:C201857，保藏时间为2018年2月10日的MDCK细胞全悬浮培养至7.0×10⁶～1.0×10⁷cells/mL时，按MOI＝0.001～0.0001接种鸡胚禽流感病毒；

接毒后在pH值6.9～7.3、溶氧30～60％、温度32～37℃的环境下培养，培养的时间为48～72小时，当细胞活率降至50～60％时分离并提纯病毒粒子；

以溶解后为1升溶液计算，无血清培养基包括以下成分：

生物素3×10^-8M、氯化钙2×10^-3M、硫酸铜7.8×10^-9M、氰钴胺3×10^-7M、D-泛酸钙5×10^-5M、D-葡萄糖1.8×10^-2M、硫酸亚铁5×10^-6M、叶酸1×10^-4M、谷胱甘肽6.5×10^-7M、氢化可的松5×10^-8M、次黄嘌呤3×10^-5M、肌醇7×10^-5M、硝酸铁1.2×10^-7M、L-丙氨酸5×10^-5M、L-精氨酸7×10^-4M、L-天冬酰胺5×10^-5M、L-天冬氨酸5×10^-5M、L-半胱氨酸1×10^-4M、L-胱氨酸1×10^-4M、L-谷氨酸5×10^-5M、L-谷氨酰胺2.5×10^-3M、甘氨酸2.5×10^-4M、L-组氨酸1.5×10^-4M、L-异亮氨酸4.2×10^-4M、L-亮氨酸4.5×10^-4M、L-赖氨酸5×10^-4M、L-蛋氨酸1.2×10^-4M、L-苯丙氨酸2.2×10^-4M、L-脯氨酸1.5×10^-4M、L-丝氨酸2.5×10^-4M、L-苏氨酸4.5×10^-4M、L-色氨酸4.4×10^-5M、L-酪氨酸2.1×10^-4M、L-缬氨酸4.5×10^-4M、硫辛酸5.1×10^-7M、氯化镁6×10^-5M、硫酸镁7×10^-4M、烟酰胺1.7×10^-5M、对氨基苯甲酸2g、氯化钾4.2×10^-3M、腐胺5×10^-7M、吡多辛1.5×10^-7M、核黄素5.8×10^-7M、碳酸氢钠2.9×10^-2M、氯化钠1.19×10^-1M、磷酸氢二钠5×10^-4M、磷酸二氢钠4.5×10^-4M、丙酮酸钠1×10^-3M、硫胺素6.4×10^-6M、胸腺嘧啶脱氧核苷1.5×10^-6M、硫酸锌1.5×10^-6M、氯化胆碱1×10^-4M、胰岛素5mg、转铁蛋白5mg、三典甲状腺氨酸5×10^-12M、二硫苏糖醇6.5×10^-6M、亚油酸2×10^-7M、苯酚红3.6×10^-5M、泊洛沙姆2g、前列腺素E2 7×10^-8M、H₂SeO₃ 3×10^-8M以及Na₂SiO₃ 5×10^-7M。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在接种鸡胚禽流感病毒时还按照3～8μg/mL的量添加胰蛋白酶。