[发明专利]磷酸化多肽抗原疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种磷酸化多肽抗原疫苗，其包含来自人全长Tau蛋白的两个多肽片段，其中所述两个多肽片段来自人全长Tau蛋白的如下区域：人全长Tau蛋白的第194-266位氨基酸和人全长Tau蛋白的第392-408位氨基酸，并且含有磷酸化位点；其中所述两个多肽片段通过肽键直接相连，连接后的氨基酸序列如SEQ ID NO.875或SEQ ID NO.1020所示，所述磷酸化位点为对应于人全长Tau蛋白的氨基酸序列的第202、205、396和404位发生磷酸化的氨基酸位点，即，P-Ser₂₀₂、P-Thr₂₀₅、P-Ser₃₉₆和P-Ser₄₀₄，其中人全长Tau蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.1332所示。

2.一种复合物疫苗，其由权利要求1的磷酸化多肽抗原疫苗与载体偶联形成。

3. 权利要求2的复合物疫苗，其中所述载体选自人血清白蛋白、钥孔蓝蛋白素、细菌样颗粒BLP、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵清蛋白、牛血清白蛋白组分V、流感血球凝集素、PAN-DR结合肽、疟疾环子孢子蛋白、乙型肝炎表面抗原HBSAg19-28、热休克蛋白65、卡介苗、霍乱毒素、减毒的霍乱毒素变体、白喉毒素、诺如病毒衣壳P蛋白、重组链球菌C5a肽酶、化脓链球菌ORF1224、化脓链球菌ORF1664、化脓链球菌ORF2452、肺炎链球菌溶血素、减毒的肺炎链球菌溶血素变体、肺炎衣原体ORFT367、肺炎衣原体ORFT858、破伤风类毒素、HIVgp120T1、识别粘附基质分子的微生物表面组分、生长因子、激素和/或趋化因子。

4.权利要求3的复合物疫苗，其中所述载体为细菌样颗粒BLP。

5.权利要求3的复合物疫苗，其中所述载体为诺如病毒衣壳P蛋白。

6. 权利要求5的复合物疫苗，其中所述诺如病毒衣壳P蛋白为PP-3C，其序列如SEQ IDNO.1357所示，或PP-3K，其序列如SEQ ID NO.1359所示。

7.制备权利要求2的复合物疫苗的方法，所述方法包括如下步骤：

1）人工合成权利要求1的磷酸化多肽抗原疫苗；

2）制备待与所述磷酸化多肽抗原疫苗偶联的载体；

3）将所述磷酸化多肽抗原疫苗与所述载体混合以进行偶联反应；

4）分离纯化3）中所得的偶联体，由此获得复合物疫苗。

8.权利要求7的方法，其中步骤2）中的载体为诺如病毒衣壳P蛋白，所述诺如病毒衣壳P蛋白为PP-3C或PP-3K，具体包括以下步骤：

i) 获得含有编码PP-3C或PP-3K蛋白的核酸的表达载体；

ii) 将所述表达载体转入受体细胞；

iii) 表达所述PP-3C或PP-3K蛋白并在受体细胞中自组装成重组P颗粒。

9.权利要求8的方法，还包括分离和纯化步骤。

10.权利要求9的方法，其中使用离子交换色谱法和/或疏水层析色谱法进行纯化。

11.权利要求7的方法，其中步骤3）采用PP-3C作为疫苗载体进行偶联；或步骤3）采用PP-3K作为疫苗载体进行偶联。

12.权利要求11的方法，其中采用PP-3C作为疫苗载体进行偶联的缓冲体系为碳酸氢铵缓冲体系。

13.权利要求12的方法，其中碳酸氢铵缓冲体系的pH范围为7.5-8.8。

14.权利要求13的方法，其中所述磷酸化多肽抗原疫苗与所述载体以10:1-100:1比例进行混合。