[发明专利]一种人弓形虫抗体检测的间接ELISA试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种人弓形虫抗体检测的间接ELISA试剂盒及其制备方法，属于生物技术领域。试剂盒包括重组抗原GRA15预包被板、样品稀释液、阳性对照、阴性对照、酶结合物、封闭液、洗涤液、显色液和终止液，所述重组抗原GRA15的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明使用的间接ELISA检测方法与现有的检测技术相比，操作简单、重复性好、经济、适合大规模样品检测，本发明利用我国分离的弓形虫Chineses1虫株GRA15蛋白作为间接ELISA法的包被抗原，对于我国人群的弓形虫感染检测具有更高的特异性。

技术领域

本发明公开了一种人弓形虫抗体检测的间接ELISA试剂盒及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

弓形虫是一种寄生原虫，几乎能感染所有的温血动物。人类感染弓形虫可以导致孕妇流产、死胎、畸形、胎儿生长发育受阻，甚至死亡。还会对免疫缺陷人群、AIDS感染者、器官移植者造成弓形虫眼病、弓形虫脑病等疾病。而且弓形虫尚无有效疫苗，对人类的健康造成严重威胁，因此人类弓形虫感染的检测对于疾病的预防和控制具有重要意义。建立一种有效的检测弓形虫感染的技术手段和方法，对弓形虫病的防控尤为重要。

目前弓形虫诊断的方法主要包括病原学、分子生物学和免疫学等方法。病原学方法费时、费力、敏感性低。分子生物学方法，如聚合酶链反应(PCR)、核酸探针及基因芯片等技术，具有较高的敏感性和特异性，但是需要昂贵的检测设备，并且操作过程复杂。免疫学检测方法包括染色实验(DT)、免疫荧光检测(IFA)、直接血凝试验(DAT)、间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附实验(ELISA)。DT检测需要活的虫体，存在生物安全风险，不利于临床科室检测；IFA需要专门的设备检测，且操作过程繁琐，不适合临床广泛开展；IHA和DAT敏感性低；ELISA敏感性和特异性高、操作简单、生物安全风险低、经济有效，适合大量样本检测。综合对比各种检测方法，ELISA是目前最适合检测弓形虫感染的有效方法。

通过基因分型技术，发现世界各地的弓形虫株具有丰富的遗传多样性^[1]。截止2012年全球弓形虫虫株分离遗传图谱如图1所示^[2]，目前为止，弓形虫数据库中已经报道并记录的基因型有225个(http://toxodb.org/toxo)。其中，目前市场上所使用的ELISA检测试剂盒抗原或抗体均来自于以下三种基因型：Ⅰ型(RH、GT1)强毒株，Ⅱ型(ME49、PRU)弱毒株，Ⅲ型(CTG)无毒株，然而，上述3个基因型为欧洲、美洲和非洲的优势基因型^[3-5]。公布号为CN104897891A的中国专利，公开了一种弓形虫检测试剂盒，试剂盒中包括弓形虫抗原，且所述抗原包括致密颗粒蛋白GRA15(ToxoDB:TGME49_275470)，但该抗原来源于ME49虫株，是欧美流行株。

我们从我国分离了多株猫源和人源性弓形虫，基因分型结果显示与上述3个原型克隆谱系截然不同，结合国内其他学者对动物源虫株的分型结果，确定Chinese1(ToxoDB#9)为中国流行的弓形虫优势基因型^[6-10]。本发明中使用GRA15蛋白分离于我国特有的弓形虫基因型Chinese1，氨基酸序列不同于欧美流行虫株，尤为适用于检测我国流行的弓形虫，具有更高的准确性，提高检出率。